EDTA-K2诱导的血小板聚集对血细胞计数的影响
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【摘 要】目的研究EDTA-K2诱导血小板聚集所引起的血液分析仪计数RBC、WBC及PLT的数值变化。方法采用血液分析仪检测EDTA-K2抗凝血,同时手工计数标本和涂片镜检,并作相应比较得出结论。结果血液分析仪检测的部分EDTA-K2抗凝血血小板计数低于手工法计数的结果,而白细胞计数结果却高于后者,二者差别均有临床意义。结论对于EDTA-K2抗凝的静脉血个别患者可能会发生血小板聚集,从而引起血小板假性减少PTCP(pseudothrombocytopenia),WBC计数假性增高,所以应该引起重视,及时纠正,避免一些不必要的检查和治疗。
【关键词】EDTA-K2;血小板聚集;血细胞计数
血液分析仪在全国各级医院已普及,相对于传统的手工法来说其优点是简单、快捷、重复性好等,但很多外界因素都会影响其检测的准确性。EDTA-K2抗凝血引起的个别人血小板发生聚集就是典型的例子,它可以导致EDTA依赖性的假性血小板减少(EDTA-dependent PTCP)[1],同时还造成白细胞数计数的偏高,引起临床误诊,本次实验对7例血小板聚集患者进行了分析研究。
1资料与方法
1.1检测对象2007年8月～2008年8月EDTA-K2抗凝有血小板聚集的患者7例,其中男3例,女4例;年龄15～55岁,平均为34岁。
1.2 仪器与试剂深圳迈瑞公司BC-3200血细胞分析仪及仪器配套试剂,质控品是PHC-3D血细胞质控物(南京普朗生物技术有限公司),Olympus公司生产的双目显微镜BH-2,EDTA-K2真空抗凝管(沧州永康医药用品有限公司),盐酸稀释液、草酸铵血小板稀释液及瑞氏染液。
1.3方法首先用PHC-3D血细胞质控物监控其稳定性,然后严格按照仪器操作规程用血液分析仪检测并记录EDTA-K2抗凝血的WBC、RBC及PLT的数值,然后采集患者末梢血20 μL加0.38 mL盐酸及草酸铵稀释液由有经验的主管技师进行手工WBC、RBC及PLT计数,并制备血涂片,观察血小板数量、形态及血小板聚集情况。
1.4统计学处理数据以x±s表示,应用配对t检验。
2结果
BC-3200血细胞分析仪检测和手工计数WBC、RBC、PLT的结果及配对t检验(表1)。
3讨论
1)BC-3200血细胞分析仪的检测原理是电阻抗法:电阻抗原理又称库尔特原理,其内有一个充满导电性液体的小孔,它的脉冲是稳定的,当有细胞通过时,脉冲就会变化,它的振幅的大小反映细胞的大小,它的数量即细胞的数量[2]。其中2～35 fl为血小板,35～450 fl为白细胞,当有血小板聚集或存在大血小板且不被溶血素溶解时,仪器可误将聚集成团的血小板当作白细胞计数,因此就会出现白细胞计数偏高的现象[3],进而引起血小板的假性偏低。
2)EDTA-K2抗凝已在1993年被ICSH(International Council for Standardization in Haematology,国际血液学标准委员会)推荐用作血常规检测的抗凝剂。它对血液中细胞形态和血小板聚集性几乎均无影响,然而在临床的广泛使用中,它偶尔会引起血小板的聚集,且这种聚集不易被溶血素破坏,因为溶血素的主要成分是阳离子表面活性剂,其作用于细胞中的磷脂,使之溶解后与蛋白分离[4],从而引起血小板假性减低(PTCP),至今未发现该现象的发生有何病理、生理意义,也与特殊药物的作用无关[5]。
EDTA-K2诱导的血小板聚集可能与血小板表面存在某种隐匿性抗原有关[6]。它可导致血小板活化,血小板形态发生变化,由正常的圆盘状变为圆球形,改变了血小板膜表面某种隐匿性抗原构象,与存在血浆中的自身抗体结合,激活细胞膜中的磷酸酯酶A2和磷脂酶C,使血小板膜磷脂水解并释放花生四烯酸、ADP、5-TH、胶原、凝血酶原、内源性钙离子等活性物质。这些物质能活化血小板纤维蛋白原受体,促使血小板与纤维蛋白原聚集成团[7]。
3)对EDTA-K2抗凝血分别进行手工计数和麦瑞BC-3200血细胞分析仪计数,结果仪器法血小板计数明显低于手工法,仪器法白细胞计数明显高于手工法,差异均有显著性(P<0.01),而红细胞变化不大,差异无显著性(P>0.05)。个别患者体外的EDTA-K2抗凝血在室温条件下发生EDTA依赖性凝集,血液分析仪对凝集体的结构不能辨别,而误以为是白细胞,所以造成血小板计数的偏低和白细胞计数的偏高。而EDTA-K2抗凝血涂片镜检可见大量聚集成堆的血小板,且多分布在片尾部。此时仪器所测的血小板计数和白细胞计数是错误的,应采取手工计数及镜检。
4)在我们平时的工作中经常会遇到血小板较低的情况,特别是低于50×109/L时,不仅要及时手工计数,还应该涂片观察细胞形态变化,确保检验结果的准确性。另外,采血的过程及血液和抗凝剂的比例都很重要,采血速度慢、多次穿刺和血液比例过高都可能引起血小板凝集,堵塞仪器而无法测得真实的结果,以上问题应该引起我们的注意,加强责任心,避免给病人的诊断和治疗带来不必要的麻烦,引起医疗纠纷。
参考文献
[1]邢辉,吴健民.EDTA-K3依赖性血小板假性减少症分析[J].临床检验杂志,2004,22(4):277 ......
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