戊型肝炎病毒IgA抗体的研究进展(2)
1.2抗-HEV IgM与HE的关系目前HE的诊断主要依靠血清HEV抗体检测,抗-HEV IgM是HE急性感染的诊断指标之一[6-7],在感染HEV第2周就可以在血清中被检测到,第6周达到高峰,随后迅速下降,阳性持续时间较短(3个月左右)。而且抗-HEV IgM现有诊断试剂常有漏诊和误诊。众所周知,类风湿因子等的存在会影响血清IgM的检测,造成假阳性,这在其他疾病检测中屡见不鲜,抗-HEV IgM检测也不例外[8-9]。而抗-HEV IgM检测也常常有假阴性报道,Nicand等[5]在抗-HEV IgM阴性的HE亚临床感染患者体内发现病毒血症和粪便排毒;Mitsui等[10]也报道在医疗工作人员系列血清追踪调查中,HE亚临床型感染患者出现短暂病毒血症,而IgM检测持续阴性;Gotanda等[11]报道了在谷丙转氨酶明显升高的献血员中,出现HEV病毒血症却无IgM反应性,等等。最近,Zhao等[9]又发现在11例HEV抗原阳性的HE患者血清中,抗-HEV IgM阴性。这部分漏诊的带毒者即成为HEV的移动传染源,有可能是造成HE区域性小规模流行和持续散发的原因。这说明现有的IgM诊断试剂尚不能满足HEV感染的临床诊断和流行病学筛查与防治的需要。
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1.3抗-HEV IgG与HE的关系抗-HEV IgG一般在发病2周后可检测到,在第7周达到高峰,并能一直保持在较高的水平,至少可持续1年甚至数年,因此抗-HEV IgG不能鉴别患者为HEV急性感染还是既往感染[8,12]。有研究表明IgG抗体亲和力高低测定可诊断是否为急性感染。通常感染初期IgG亲和力低,恢复期IgG亲和力高,但重复感染患者通常也表现为IgG亲和力高。这种情况在孕妇弓型虫感染患者中也有报道。虽然抗体亲和力能用来区分感染时间,特别是亚临床和无黄疸的患者,也可以鉴定抗-HEV IgM阴性的急性感染,但高和低亲和力的区分不得不凭经验,而且不是所有急性感染都是抗-HEV IgG亲和力都低,也有的患者发病早期抗-HEV IgG阳性,而亲和力高,因此抗体亲和力实验只能作为一种验证实验[13]。
1.4抗-HEV IgA与HE的关系IgA作为免疫球蛋白中一个重要的成员,在黏膜免疫中起着重要的作用。认为可以作为外部屏障作用阻止病毒吸附到黏膜上皮细胞,同时拦截正在感染上皮细胞的病毒,并通过分泌作用将截获的病毒送回到上皮细胞外,已经证实在脊灰病毒、汉坦病毒等感染中,IgA发挥不容忽视的作用[14-15]。EBV-VCA-IgA的检测已被公认是鼻咽癌早期发现、早期诊断、预后监测及大规模普查的敏感、可靠、简便的方法,是提高鼻咽癌早期确诊率的有效途径[16]。IgA抗体被证实在一些病毒性疾病的急性感染期升高,可以作为早期诊断的标志。
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在大部分HEV早期感染患者中,可检测到抗-HEV IgM和抗-HEV IgA阳性,但抗-HEV IgA阳性持续时间比
抗-HEV IgM长,平均约为(120±23)d,对HEV感染的早期诊断更有意义[8]。早在1993年Chau等[17]就发现血清抗-HEV IgA与IgM同步升高,在恢复期消失,可以作为HEV急性期的感染指标。近年来越来越多的研究证实了这种观点[18-19],IgA作为HEV急性诊断指标的研究越来越受到人们的重视。Takahashi等[20]在猪感染HEV的研究中发现,抗-HEV IgA与病毒血症的相关性远远高于抗-HEV IgM,提示
抗-HEV IgA可以指示排毒。而且有些急性感染的患者没有ALT的升高,会有短期的病毒血症,抗-HEV IgG阳性,抗-HEV IgM阴性,却可以检测到抗-HEV IgA阳性,类似情况在脊髓灰质炎病毒、汉坦病毒引起的病例中也有过相关报道[14-15]。有研究表明抗-HEV IgA是HE的急性指标,可代替或辅助现有IgM诊断试剂用于HE诊断,既增加了检测特异性,又能有效减少漏诊[19-21]。
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2抗-HEV IgA的检测方法
2.1蛋白印迹试验检测抗-HEV IgA有文献报道用蛋白印迹试验检测抗-HEV IgA[22],这种方法具有灵敏度高、特异性好的特点,可用作HE患者的确证试验。但这种方法操作复杂,耗时较长,影响因素较多,不适合在临床上广泛开展。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗-HEV IgA的方法,具有灵敏、快速、操作简便、费用较低的优点,操作中可用较少的人力快速处理大批量血清标本,检测结果既可直接用肉眼定性判断,也可借助酶标仪精确定量读数,数据重复性好,结果客观可靠,还可借助全自动酶免分析仪使操作过程实现自动化、标准化,适合临床常规检测,是目前HE实验室辅助诊断方法的研究热点。
2.2HEV IgA间接法ELISA目前文献报道检测抗-HEV IgA多用间接法ELISA,其原理是将用已包被抗原与特异性IgM、IgG、IgA结合,由于患者血清中存在大量的抗-HEV IgG、抗-HEV IgM与抗-HEV IgA竞争结合位点,从而敏感性降低,须通过去除抗-HEV IgG和抗-HEV IgM来提高其敏感性[9]。同时因间接法所包被抗原采用基因1型或2型HEV重组蛋白或合成肽抗原,有研究表明,用第1、2基因型多肽做抗原对检测第3和4基因型感染患者的抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和抗-HEV IgA时,其反应不敏感[23]。最近,Bendall等[13]研究发现,以HEV第1、2基因型抗原建立的ELISA诊断试剂在检测英国本土HEV第3基因型感染的患者血清时,急性期HEV抗体检出率可达95%,而半年后检出率仅为12%。Herremans等[22]则发现以HEV第1、2型抗原检测HEV第1型感染,检出率为100%,而检测第3基因型毒株感染时,检出率仅为67%(ELISA)和57%(immunoblot assay)。由于HEV具有多基因型的特征,不同基因型抗原和感染不同基因型HEV患者血清反应时会出现抗原抗体结合的差异,这是导致一些检测方法漏检的主要原因。因此建立高灵敏度和特异性的ELISA检测方法需要使用具有广泛反应性的抗原,尤其是对我国这样存在多基因型HEV感染的国家以及地区进行临床诊断和流行病学筛查[4]。
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3抗-HEV IgA检测需要解决的问题
抗-HEV IgA抗体被证实在HEV急性感染期升高,可以作为早期诊断的标志,已经越来越被认可和重视。目前国内外还没有抗-HEV IgA诊断试剂盒正式上市,虽然检测抗-HEV IgA方法已经有了很大的进展,但还存在很多问题:①因各种检测方法采用的抗原不尽相同,因此敏感性差。最早对HEV的研究表明,HEV基因型按地理位置分布,一个地方只存在一种基因型,但是随着新的HEV毒株不断被发现,同一个地区可以存在两种及以上的基因型。随着与经济发展相适应的全球人员流动性的增加以及HEV研究的深入,HEV基因型的地域分布特征已经并将继续发生重要改变。这种情况下,使用多基因型混合抗原建立酶联免疫检测方法,可以大大减少漏诊率。②因为抗IgA与IgA不同片段结合位点的差异,导致检测方法的敏感性也会有较大差异,选择与IgA反应性高的抗IgA单克隆抗体,可提高抗-HEV IgA检测的敏感性和特异性[17]。③IgA可以从黏膜中分泌,故如能取唾液进行检测,不仅方便而且减轻患者痛苦,值得进一步研究。④在免疫球蛋白缺乏症患者中,HEV近期感染者其抗-HEV IgA可能表现为阴性。⑤通过血液传播的患者可逃避黏膜免疫,IgA很低甚至没有。, 百拇医药(周越球 陆松尧 梁立敏)
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1.3抗-HEV IgG与HE的关系抗-HEV IgG一般在发病2周后可检测到,在第7周达到高峰,并能一直保持在较高的水平,至少可持续1年甚至数年,因此抗-HEV IgG不能鉴别患者为HEV急性感染还是既往感染[8,12]。有研究表明IgG抗体亲和力高低测定可诊断是否为急性感染。通常感染初期IgG亲和力低,恢复期IgG亲和力高,但重复感染患者通常也表现为IgG亲和力高。这种情况在孕妇弓型虫感染患者中也有报道。虽然抗体亲和力能用来区分感染时间,特别是亚临床和无黄疸的患者,也可以鉴定抗-HEV IgM阴性的急性感染,但高和低亲和力的区分不得不凭经验,而且不是所有急性感染都是抗-HEV IgG亲和力都低,也有的患者发病早期抗-HEV IgG阳性,而亲和力高,因此抗体亲和力实验只能作为一种验证实验[13]。
1.4抗-HEV IgA与HE的关系IgA作为免疫球蛋白中一个重要的成员,在黏膜免疫中起着重要的作用。认为可以作为外部屏障作用阻止病毒吸附到黏膜上皮细胞,同时拦截正在感染上皮细胞的病毒,并通过分泌作用将截获的病毒送回到上皮细胞外,已经证实在脊灰病毒、汉坦病毒等感染中,IgA发挥不容忽视的作用[14-15]。EBV-VCA-IgA的检测已被公认是鼻咽癌早期发现、早期诊断、预后监测及大规模普查的敏感、可靠、简便的方法,是提高鼻咽癌早期确诊率的有效途径[16]。IgA抗体被证实在一些病毒性疾病的急性感染期升高,可以作为早期诊断的标志。
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在大部分HEV早期感染患者中,可检测到抗-HEV IgM和抗-HEV IgA阳性,但抗-HEV IgA阳性持续时间比
抗-HEV IgM长,平均约为(120±23)d,对HEV感染的早期诊断更有意义[8]。早在1993年Chau等[17]就发现血清抗-HEV IgA与IgM同步升高,在恢复期消失,可以作为HEV急性期的感染指标。近年来越来越多的研究证实了这种观点[18-19],IgA作为HEV急性诊断指标的研究越来越受到人们的重视。Takahashi等[20]在猪感染HEV的研究中发现,抗-HEV IgA与病毒血症的相关性远远高于抗-HEV IgM,提示
抗-HEV IgA可以指示排毒。而且有些急性感染的患者没有ALT的升高,会有短期的病毒血症,抗-HEV IgG阳性,抗-HEV IgM阴性,却可以检测到抗-HEV IgA阳性,类似情况在脊髓灰质炎病毒、汉坦病毒引起的病例中也有过相关报道[14-15]。有研究表明抗-HEV IgA是HE的急性指标,可代替或辅助现有IgM诊断试剂用于HE诊断,既增加了检测特异性,又能有效减少漏诊[19-21]。
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2抗-HEV IgA的检测方法
2.1蛋白印迹试验检测抗-HEV IgA有文献报道用蛋白印迹试验检测抗-HEV IgA[22],这种方法具有灵敏度高、特异性好的特点,可用作HE患者的确证试验。但这种方法操作复杂,耗时较长,影响因素较多,不适合在临床上广泛开展。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗-HEV IgA的方法,具有灵敏、快速、操作简便、费用较低的优点,操作中可用较少的人力快速处理大批量血清标本,检测结果既可直接用肉眼定性判断,也可借助酶标仪精确定量读数,数据重复性好,结果客观可靠,还可借助全自动酶免分析仪使操作过程实现自动化、标准化,适合临床常规检测,是目前HE实验室辅助诊断方法的研究热点。
2.2HEV IgA间接法ELISA目前文献报道检测抗-HEV IgA多用间接法ELISA,其原理是将用已包被抗原与特异性IgM、IgG、IgA结合,由于患者血清中存在大量的抗-HEV IgG、抗-HEV IgM与抗-HEV IgA竞争结合位点,从而敏感性降低,须通过去除抗-HEV IgG和抗-HEV IgM来提高其敏感性[9]。同时因间接法所包被抗原采用基因1型或2型HEV重组蛋白或合成肽抗原,有研究表明,用第1、2基因型多肽做抗原对检测第3和4基因型感染患者的抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和抗-HEV IgA时,其反应不敏感[23]。最近,Bendall等[13]研究发现,以HEV第1、2基因型抗原建立的ELISA诊断试剂在检测英国本土HEV第3基因型感染的患者血清时,急性期HEV抗体检出率可达95%,而半年后检出率仅为12%。Herremans等[22]则发现以HEV第1、2型抗原检测HEV第1型感染,检出率为100%,而检测第3基因型毒株感染时,检出率仅为67%(ELISA)和57%(immunoblot assay)。由于HEV具有多基因型的特征,不同基因型抗原和感染不同基因型HEV患者血清反应时会出现抗原抗体结合的差异,这是导致一些检测方法漏检的主要原因。因此建立高灵敏度和特异性的ELISA检测方法需要使用具有广泛反应性的抗原,尤其是对我国这样存在多基因型HEV感染的国家以及地区进行临床诊断和流行病学筛查[4]。
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3抗-HEV IgA检测需要解决的问题
抗-HEV IgA抗体被证实在HEV急性感染期升高,可以作为早期诊断的标志,已经越来越被认可和重视。目前国内外还没有抗-HEV IgA诊断试剂盒正式上市,虽然检测抗-HEV IgA方法已经有了很大的进展,但还存在很多问题:①因各种检测方法采用的抗原不尽相同,因此敏感性差。最早对HEV的研究表明,HEV基因型按地理位置分布,一个地方只存在一种基因型,但是随着新的HEV毒株不断被发现,同一个地区可以存在两种及以上的基因型。随着与经济发展相适应的全球人员流动性的增加以及HEV研究的深入,HEV基因型的地域分布特征已经并将继续发生重要改变。这种情况下,使用多基因型混合抗原建立酶联免疫检测方法,可以大大减少漏诊率。②因为抗IgA与IgA不同片段结合位点的差异,导致检测方法的敏感性也会有较大差异,选择与IgA反应性高的抗IgA单克隆抗体,可提高抗-HEV IgA检测的敏感性和特异性[17]。③IgA可以从黏膜中分泌,故如能取唾液进行检测,不仅方便而且减轻患者痛苦,值得进一步研究。④在免疫球蛋白缺乏症患者中,HEV近期感染者其抗-HEV IgA可能表现为阴性。⑤通过血液传播的患者可逃避黏膜免疫,IgA很低甚至没有。, 百拇医药(周越球 陆松尧 梁立敏)