621100 四川省三台县人民医院 杨勇琼

    310002 南京军区杭州疗养院海勤疗养区 周晓明

    310015 杭州师范大学附属医院 王建军

    结核病仍然是危害全球公众健康问题的主要原因之一，全球每年有新发结核病人800万，200万人因结核病死亡[1-2]。在过去几十年里，结核病与糖尿病的相关性受到广泛关注，大量的回顾性研究表明糖尿病患者对结核病具有高度易感倾向，糖尿病是结核发生及耐多药的重要危险因素之一[3]。

    尽管有众多证据显示糖尿病会引起患者显著增加对肺结核的易感性，但是目前关于糖尿病患者易感肺结核的免疫机制的报道尚少。有研究者发现糖尿病合并肺结核患者PBMC分泌细胞因子水平发生改变，表现为Th1/Th2比例下降[4]。在宿主抗结核免疫中，Th1细胞能介导巨噬细胞活化来抑制结核杆菌感染。糖尿病合并肺结核患者PBMC是否存在一定的免疫功能缺陷，目前国内尚无相关报道。本实验通过检测糖尿病合并肺结核患者体内巨噬细胞活化程度及巨噬细胞杀灭结核杆菌能力等来明确上述问题。

    1 材料和方法

    1.1 人外周血标本 研究对象均来自2009-02—2010-02重庆医科大学附属第一医院肺科收治的新发和复发确诊为肺结核的病人、糖尿病合并肺结核病人各20例及健康志愿者20例。研究者年龄<50岁。HBsAg阴性，HIV抗体阴性，并签署知情同意书的志愿者。

    1.2 主要试剂 胎牛血清购自杭州四季青；Ficoll淋巴细胞分离液购自天津灏阳生物；NO检测试剂盒、TNF-α ELISA试剂盒均购于南京建成公司；改良罗氏培养基购于杭州创新生物公司；结核杆菌株由重庆医科大学附属第一医院呼吸内科P2实验室提供。

    1.3 巨噬细胞的分离培养及成熟诱导 取健康组、结核病组、糖尿病合并肺结核组肝素抗凝外周全血20 mL，经密度梯度离心法(2 500 r/min×20 min)分离单个核细胞。生理盐水洗3次，用完全培养基 (10%胎牛血清的1640培养液)调整细胞浓度为2×106/mL ......