宋红群 王宁 李超彦

    结肠癌(colorectal cancer，CRC)是世界范围内许多国家恶性肿瘤高死亡率的原因之一[1]，在发达国家每年影响人数超过100万人[2]，严重威胁着人类健康。在我国恶性肿瘤患者中，结肠癌的发病率和死亡率均较高，发病率居恶性肿瘤发病率的第三位，仅次于肺癌和胃癌，死亡率居第五位[3]。结肠癌易复发和转移，故其病死率较高，预后较差。尽管随着治疗手段的不断改进，结直肠癌的治疗效果得到明显改善，但在2008年的统计中，其病死率仍达8.8%。结肠癌的肿瘤发生及复发转移是多因素参与的复杂过程，除肿瘤细胞微环境的改变外，调节细胞周期、生长及凋亡的相关癌基因和抑癌基因表达异常在其发生过程中起着非常重要的作用[4-6]。

    黄芩素属黄酮类物质，主要来源于黄芩的根部。黄芩素具有明显的抗炎活性，且与NF-kappaB的激活关系密切[7]。有研究表明，黄芩素能在人卵巢癌等肿瘤细胞中表现出明显的抗肿瘤作用[8-10]。我们的前期研究显示，黄芩素能够影响结肠癌细胞的增生及凋亡，但其作用机制尚不清楚。本研究以人结肠癌细胞系SW620为对象，观察不同浓度黄芩素对其细胞生长及肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase and tensin homologue，PTEN)和Akt蛋白表达的影响，探讨黄芩素的抗肿瘤作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验药物 黄芩素，分子量270.24，黄色粉末，规格100 mg，购自sigma公司(465119)，纯度≥98%，易溶于乙醇、甲醇。取黄芩素粉末10 mg，溶于甲醇中，制备成200 μmol/L的溶液备用。使用前用DMEM培养基稀释成所需浓度加入培养细胞中。

    1.2 细胞 人结肠癌细胞SW620为51岁白人来源的结肠腺癌发生转移后的淋巴结转移组织，购置于上海生物研究所。

    1.3 其他材料 试剂低糖DMEM细胞培养基及胎牛血清购自Gibco公司(11885092，10099-141)，MTT购自sigma公司(M2128)；EdU检测试剂盒购自Invitrogen公司(C10646)；蛋白提取试剂盒购自Calbiochem公司(539790)；DMEM培养基及胎牛血清购自Gibco公司(11885092)；Transwell小室购自美国BD公司(353093)；兔抗人多克隆PTEN、Akt及p-Akt S473抗 体 购 自 ABCam公 司 (ab32199，ab126811，ab66138)；山羊抗兔二抗购自北京中杉金桥公司(ZB-5301) ......