骆启晗 潘珍珍 石荣珍 高建莉

    温泉是一种由地壳深处受地热作用而从地下自然涌出来的泉水[1]，泉水温度超过25 ℃，富含多种矿物质元素，如钾、钙、钠等，以及氡、镭等放射性元素，且温泉水中的二氧化碳、硫化氢等气体也具有医疗价值[2]。温泉水浴对多种疾病都有明显的疗效。相关研究认为温泉水浴可降低个体血压及血糖、血脂水平，辅助治疗糖尿病并发症，还可治疗呼吸道疾病、顽固性皮肤病，缓解类风湿性关节炎症状等[3]。

    锗(Ge)是一种具有多种生物活性的微量元素，对人体具有广泛的防病治病等功效，被科学家称为“21世纪的救命锗”“生命的奇效元素”[4]。锗对于免疫调节、癌症预防、慢性肝炎治疗等都具有积极作用。五没食子酰葡萄糖锗(PGG-Ge)对人乳腺癌细胞MCF7等6种肿瘤细胞的增生均具有明显的抑制作用[5]；Ge-132能够有效抑制3LL肺癌细胞的迁移和生长；合成抗坏血酸有机锗倍半氧化物能够抑制S-180肉瘤的生长, 其能效可以达到与广谱抗癌药物环磷酰胺相当的水平；合成多酚锗也能够有效地抑制HepG2肿瘤细胞的生长[6]。锗元素在自然界分布广泛，在许多地区的矿泉水及地下水都发现含锗。本实验所使用的温泉水样本取自福建省清流县天芳悦潭，经ICP-MS检测，锗含量为0.01 mg/L，通过研究富锗温泉水对4T1乳腺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长、转移的抑制作用及机体免疫功能的影响，明确其对乳腺癌荷瘤机体的作用。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株 4T1 小鼠乳腺癌细胞株，由中国科学院细胞库提供。采用DMEM培养基(添加NaHCO31.5 g/L，青霉素1×105U/L、链霉素100 mg/L)90%，优质胎牛血清 (批号：A66E00F，Gemini，美国)10%在37 ℃、饱和湿度及5% CO2的细胞培养箱内培养，每2～3 d传代1次。

    1.2 药物、试剂及仪器 注射用环磷酰胺(CTX)(江苏盛迪医药公司，批号14120525，规格200 mg/瓶，Milli-Q水配成0.67 mg/mL，-20 ℃保存)；黄芪购于浙江中医药大学附属第一医院(浙江省中医院)中药房，70%乙醇回流提取，冷冻干燥后，制备成浸膏。临用前生理盐水稀释灌胃给药。温泉水样本取自福建省清流县天芳悦潭，经ICP-MS检测，锗含量为0.01 mg/L，水样采用0.22 μm微孔滤膜过滤后-20 ℃保存，临用前解冻。细胞培养瓶T75(Nunc，批号：7133428)；DMEM高糖培养液[赛默飞世尔(苏州)仪器有限公司，批号：8117065]；0.25%Trypsin & 0.25%胰酶溶液(杭州吉诺生物医药技术有限公司 ......