熊果酸和齐墩果酸的抗消化系肿瘤作用(2)
OA和UA诱导人肝细胞癌HuH7细胞凋亡，抑制生长的IC50分别为100和75 μM。随着OA和UA浓度增加，HuH7细胞的亚G1期百分数相应提高。机制研究认为，OA和UA是通过促使线粒体中细胞色素C释放到胞液，导致半胱天冬酶-9和半胱天冬酶-3活化并诱导多聚ADP核糖多聚酶裂解，同时通过抑制核因子-κB活性和下调凋亡蛋白的X-连锁抑制因子(XIAP)而诱导HuH7细胞凋亡的[27]。UA抑制小鼠肝细胞瘤H22的体内生长，也能显著提高肝癌HepS细胞的凋亡率[28]。
4 抗其它消化系肿瘤作用
UA抑制人舌鳞癌TSCCa细胞浆中核因子-κB mRNA的表达，IC50为1.25 μM[29]。
UA(20～50 μM)显著抑制人食管癌Eca-109细胞增殖，电镜下可见典型的凋亡形态和坏死形态。机制研究发现，UA的抗Eca-109细胞作用与其提高Bax和p27 kip1蛋白表达、下调Bcl-2表达和将细胞滞留在G0/G1期有关[30]。UA、OA或含UA、OA等三萜化合物的日本杏提取物与氟尿嘧啶联用对食管鳞状癌YZS-2细胞的细胞毒作用有相加或协同作用，使细胞周期滞留在G2/M期和S期并诱导凋亡。在严重免疫缺陷小鼠腹腔注射YES-2细胞制造的腹腔血性腹水食管癌模型中，此种日本杏提取物可增强氟尿嘧啶的抗癌作用，使直径大于2 mm的腹腔结节数少于单用氟尿嘧啶或日本杏提取物治疗组[31]。
, 百拇医药
5 抗诱变和抗促癌作用
女贞子中的OA和UA浓度依赖性对抗苯并芘对鼠伤寒沙门菌的诱变活性，其中UA抗诱变作用强于OA[32]。UA在上述Ames试验中也抑制黄曲霉毒素B1的诱变性[33]。小鼠外周血和骨髓微核试验表明，灌服80 mg/kg的UA、OA或OA和UA混合物都能显著降低阿霉素所致微核发生率[34]。皮下注射OA 50、75和100 mg/kg发现，OA剂量依赖性抑制乌拉坦或环磷酰胺所致微核率(染色体损伤)的明显升高[35]。UA也明显降低环磷酰胺所致微核发生率[36]。UA和OA本身无致突变作用。UA的抗基因毒作用需要预先通过细胞介导(预先与细胞一起培养)，如与特丁基过氧化氢一起同时与细胞培养，则不能阻滞HepG2细胞中的DNA氧化损伤。此外，UA还有DNA修复功能[37]。最近研究发现，UA不仅对过氧化氢引起的人结肠腺癌Caco-2细胞中的DNA损伤有保护作用，也能提高过氧化氢性DNA损伤的修复率，提示UA有抗结肠癌发生的作用[38]。
, 百拇医药 给大鼠连续6周灌服20 mg/kg UA可对抗二乙基亚硝胺诱导、苯巴比妥促进的氧化应激性肝细胞癌形成，明显降低肝组织过氧化脂质和蛋白碳酰水平，恢复组织和浆膜ATP酶活性以及糖蛋白水平，有效抑制氧化应激对大鼠肝脏的伤害[39]。
体内、外实验表明，OA和UA能抑制佛波醇酯的促癌作用，对佛波醇酯诱导Raji细胞中EB病毒早期抗体活化具有几乎与维甲酸相同的抑制作用，并使Raji细胞的存活率更高。二阶段致癌实验也发现，外涂OA或UA明显抑制佛波醇酯对二甲基苯并蒽诱导的小鼠皮肤癌的促癌作用，其中UA的作用更强些。OA和UA并不影响佛波醇酯与受体结合，但明显抑制促癌剂佛波醇酯提高小鼠皮肤鸟氨酸脱羧酶活性，引起多胺枯竭，导致生长抑制，使细胞周期滞留在G1期并出现细胞分化[33]。OA对抗佛波醇酯诱导皮肤金属硫因基因表达和无机磷掺入人宫颈癌细胞磷脂[40，41]，产生抗促癌作用。
6 增强免疫作用
, http://www.100md.com OA和UA都有保护和提高宿主防御功能、增强机体抗肿瘤的能力。OA和UA不仅促进小鼠放疗后造血系统恢复，提高外周血白细胞数，刺激脾细胞增殖，增强放疗后植物血凝素诱导脾淋巴细胞母细胞化反应[42]，还能提高吞噬细胞的防御功能。OA和UA在不影响人外周血单核细胞增殖的浓度(1.25～20 mg/L)下就能刺激γ-干扰素分泌[43]。OA还通过浓度依赖性转活核因子-κB，上调小鼠巨噬细胞中的诱生型一氧化氮合成酶和肿瘤坏死因子基因表达，刺激一氧化氮和肿瘤坏死因子合成和释放。OA的上述作用在50 μM时达到坪值，浓度大于200 μM后对巨噬细胞产生毒性[44]。用UA进行上述实验也获得了相似结果[45]。此后日本学者报道，给小鼠皮肤外涂UA显著促进皮肤环氧化酶-1和环氧化酶-2以及肿瘤坏死因子-α mRNA表达。体外实验发现，UA通过激活细胞外信号调节激酶-2，触发休止的巨噬细胞释放游走抑制因子，但不提高细胞内游走抑制因子mRNA表达。UA也浓度和时间依赖性促进小鼠腹腔巨噬细胞促进白介素-1β和白介素-6以及游走抑制因子释放。给ICR品系小鼠腹腔注射UA也可提高结肠黏膜白介素-1β分泌水平和髓过氧化物酶活性。进一步研究证明，UA与巨噬细胞上的CD36结合，激活NADPH氧化酶，使活性氧生成而激活p38 MAPK(丝裂原激活的蛋白激酶)、ERK1/2(细胞外信号调节激酶1/2)和半胱天冬酶-1，诱导白介素-1β释放，同时通过ATP结合盒转运蛋白诱导白介素-1β释放。UA诱导白介素-1β释放可因不同品系小鼠巨噬细胞中CD36和NADPH氧化酶表达状态的差异而有所不同[46～49]。因此，OA和UA能在不损伤吞噬细胞的浓度下促进吞噬细胞释放白介素-1β、γ-干扰素、一氧化氮和肿瘤坏死因子等细胞因子，从而抑杀机体内的肿瘤细胞。
, http://www.100md.com
腹腔注射UA、OA或甘草酸都可提高小鼠白细胞数，UA和OA连续注射6 d使小鼠白细胞数达最多，增加百分率分别为91%±5%和136%±6%，而甘草酸需9 d达到最多，增加百分率为115%±18%，可见OA升高白细胞数作用最强，同时也增加骨髓细胞构成和α-酯酶阳性细胞数。将此三药与抗原一起处理动物时都可提高脾脏空斑形成细胞数和特异抗体滴度[50]。UA能对抗环磷酰胺的免疫抑制作用，提高小鼠外周血白细胞数、巨噬细胞吞噬功能和脾脏指数，促进脾淋巴细胞增殖[28]，刺激脾细胞白介素-2和γ-干扰素生成[51]。
我国学者早在上世纪80年代就对OA的促进免疫作用进行了研究。体外实验表明，OA本身无丝裂原样作用，但能增强植物血凝素、美洲商陆丝裂原、刀豆蛋白A和白介素-2等多种丝裂原对正常人及肿瘤病人淋巴细胞的增殖作用，对抗肿瘤病人抑制性T细胞在混合淋巴细胞培养中对正常人淋巴细胞增殖的抑制作用，对抗刀豆蛋白A诱导的抑制性淋巴细胞抑制异体淋巴细胞对丝裂原的增殖反应，但不影响NK细胞的功能。皮下注射OA 50和100 mg/kg可升高正常小鼠血清抗体IgG含量，但不影响溶血素抗体含量；能对抗可的松所致小鼠胸腺和脾脏萎缩。灌服OA 100 mg/(kg·d)能增强正常小鼠巨噬细胞的吞噬功能，使荷瘤小鼠低下的细胞免疫功能(迟发超敏反应)回复到正常水平。可是也有报道，灌服OA或齐酞酸钠(OA的一种前体药物)25、50和100 mg/(kg·d)并不影响小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能，但皮下注射和腹腔注射时可剂量依赖性明显提高小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能[52]。
15例经化、放疗治疗的恢复期恶性肿瘤病人口服OA胶囊40 mg、bid共1月，服药前低下的淋巴细胞转化率即刺激指数由37±24升至72±38，巨噬细胞吞噬率由原来的37%±19%升至53%±10%，但不影响恶性肿瘤病人的NK细胞功能。在一项包括152例中、晚期癌症病人的多中心、前瞻性、双盲临床试验中，103例服OA片40 mg、tid，共1～2月。结果与安慰剂对照组(49例)比较，OA组病人的免疫功能明显改善，如巨噬细胞吞噬率由37.9%提高到49.0%，E-玫瑰花结形成率由42.8%提高到48.2%，迟发超敏反应(旧结核菌素试验)也明显提高。多数病人服OA后一般状况好转，食欲增进，血红蛋白、白细胞和血小板数上升率分别为63%、75%和79%，且无明显副作用和肝、肾功能异常[53]。, http://www.100md.com(张明发 沈雅琴)
4 抗其它消化系肿瘤作用
UA抑制人舌鳞癌TSCCa细胞浆中核因子-κB mRNA的表达，IC50为1.25 μM[29]。
UA(20～50 μM)显著抑制人食管癌Eca-109细胞增殖，电镜下可见典型的凋亡形态和坏死形态。机制研究发现，UA的抗Eca-109细胞作用与其提高Bax和p27 kip1蛋白表达、下调Bcl-2表达和将细胞滞留在G0/G1期有关[30]。UA、OA或含UA、OA等三萜化合物的日本杏提取物与氟尿嘧啶联用对食管鳞状癌YZS-2细胞的细胞毒作用有相加或协同作用，使细胞周期滞留在G2/M期和S期并诱导凋亡。在严重免疫缺陷小鼠腹腔注射YES-2细胞制造的腹腔血性腹水食管癌模型中，此种日本杏提取物可增强氟尿嘧啶的抗癌作用，使直径大于2 mm的腹腔结节数少于单用氟尿嘧啶或日本杏提取物治疗组[31]。
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5 抗诱变和抗促癌作用
女贞子中的OA和UA浓度依赖性对抗苯并芘对鼠伤寒沙门菌的诱变活性，其中UA抗诱变作用强于OA[32]。UA在上述Ames试验中也抑制黄曲霉毒素B1的诱变性[33]。小鼠外周血和骨髓微核试验表明，灌服80 mg/kg的UA、OA或OA和UA混合物都能显著降低阿霉素所致微核发生率[34]。皮下注射OA 50、75和100 mg/kg发现，OA剂量依赖性抑制乌拉坦或环磷酰胺所致微核率(染色体损伤)的明显升高[35]。UA也明显降低环磷酰胺所致微核发生率[36]。UA和OA本身无致突变作用。UA的抗基因毒作用需要预先通过细胞介导(预先与细胞一起培养)，如与特丁基过氧化氢一起同时与细胞培养，则不能阻滞HepG2细胞中的DNA氧化损伤。此外，UA还有DNA修复功能[37]。最近研究发现，UA不仅对过氧化氢引起的人结肠腺癌Caco-2细胞中的DNA损伤有保护作用，也能提高过氧化氢性DNA损伤的修复率，提示UA有抗结肠癌发生的作用[38]。
, 百拇医药 给大鼠连续6周灌服20 mg/kg UA可对抗二乙基亚硝胺诱导、苯巴比妥促进的氧化应激性肝细胞癌形成，明显降低肝组织过氧化脂质和蛋白碳酰水平，恢复组织和浆膜ATP酶活性以及糖蛋白水平，有效抑制氧化应激对大鼠肝脏的伤害[39]。
体内、外实验表明，OA和UA能抑制佛波醇酯的促癌作用，对佛波醇酯诱导Raji细胞中EB病毒早期抗体活化具有几乎与维甲酸相同的抑制作用，并使Raji细胞的存活率更高。二阶段致癌实验也发现，外涂OA或UA明显抑制佛波醇酯对二甲基苯并蒽诱导的小鼠皮肤癌的促癌作用，其中UA的作用更强些。OA和UA并不影响佛波醇酯与受体结合，但明显抑制促癌剂佛波醇酯提高小鼠皮肤鸟氨酸脱羧酶活性，引起多胺枯竭，导致生长抑制，使细胞周期滞留在G1期并出现细胞分化[33]。OA对抗佛波醇酯诱导皮肤金属硫因基因表达和无机磷掺入人宫颈癌细胞磷脂[40，41]，产生抗促癌作用。
6 增强免疫作用
, http://www.100md.com OA和UA都有保护和提高宿主防御功能、增强机体抗肿瘤的能力。OA和UA不仅促进小鼠放疗后造血系统恢复，提高外周血白细胞数，刺激脾细胞增殖，增强放疗后植物血凝素诱导脾淋巴细胞母细胞化反应[42]，还能提高吞噬细胞的防御功能。OA和UA在不影响人外周血单核细胞增殖的浓度(1.25～20 mg/L)下就能刺激γ-干扰素分泌[43]。OA还通过浓度依赖性转活核因子-κB，上调小鼠巨噬细胞中的诱生型一氧化氮合成酶和肿瘤坏死因子基因表达，刺激一氧化氮和肿瘤坏死因子合成和释放。OA的上述作用在50 μM时达到坪值，浓度大于200 μM后对巨噬细胞产生毒性[44]。用UA进行上述实验也获得了相似结果[45]。此后日本学者报道，给小鼠皮肤外涂UA显著促进皮肤环氧化酶-1和环氧化酶-2以及肿瘤坏死因子-α mRNA表达。体外实验发现，UA通过激活细胞外信号调节激酶-2，触发休止的巨噬细胞释放游走抑制因子，但不提高细胞内游走抑制因子mRNA表达。UA也浓度和时间依赖性促进小鼠腹腔巨噬细胞促进白介素-1β和白介素-6以及游走抑制因子释放。给ICR品系小鼠腹腔注射UA也可提高结肠黏膜白介素-1β分泌水平和髓过氧化物酶活性。进一步研究证明，UA与巨噬细胞上的CD36结合，激活NADPH氧化酶，使活性氧生成而激活p38 MAPK(丝裂原激活的蛋白激酶)、ERK1/2(细胞外信号调节激酶1/2)和半胱天冬酶-1，诱导白介素-1β释放，同时通过ATP结合盒转运蛋白诱导白介素-1β释放。UA诱导白介素-1β释放可因不同品系小鼠巨噬细胞中CD36和NADPH氧化酶表达状态的差异而有所不同[46～49]。因此，OA和UA能在不损伤吞噬细胞的浓度下促进吞噬细胞释放白介素-1β、γ-干扰素、一氧化氮和肿瘤坏死因子等细胞因子，从而抑杀机体内的肿瘤细胞。
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腹腔注射UA、OA或甘草酸都可提高小鼠白细胞数，UA和OA连续注射6 d使小鼠白细胞数达最多，增加百分率分别为91%±5%和136%±6%，而甘草酸需9 d达到最多，增加百分率为115%±18%，可见OA升高白细胞数作用最强，同时也增加骨髓细胞构成和α-酯酶阳性细胞数。将此三药与抗原一起处理动物时都可提高脾脏空斑形成细胞数和特异抗体滴度[50]。UA能对抗环磷酰胺的免疫抑制作用，提高小鼠外周血白细胞数、巨噬细胞吞噬功能和脾脏指数，促进脾淋巴细胞增殖[28]，刺激脾细胞白介素-2和γ-干扰素生成[51]。
我国学者早在上世纪80年代就对OA的促进免疫作用进行了研究。体外实验表明，OA本身无丝裂原样作用，但能增强植物血凝素、美洲商陆丝裂原、刀豆蛋白A和白介素-2等多种丝裂原对正常人及肿瘤病人淋巴细胞的增殖作用，对抗肿瘤病人抑制性T细胞在混合淋巴细胞培养中对正常人淋巴细胞增殖的抑制作用，对抗刀豆蛋白A诱导的抑制性淋巴细胞抑制异体淋巴细胞对丝裂原的增殖反应，但不影响NK细胞的功能。皮下注射OA 50和100 mg/kg可升高正常小鼠血清抗体IgG含量，但不影响溶血素抗体含量；能对抗可的松所致小鼠胸腺和脾脏萎缩。灌服OA 100 mg/(kg·d)能增强正常小鼠巨噬细胞的吞噬功能，使荷瘤小鼠低下的细胞免疫功能(迟发超敏反应)回复到正常水平。可是也有报道，灌服OA或齐酞酸钠(OA的一种前体药物)25、50和100 mg/(kg·d)并不影响小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能，但皮下注射和腹腔注射时可剂量依赖性明显提高小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能[52]。
15例经化、放疗治疗的恢复期恶性肿瘤病人口服OA胶囊40 mg、bid共1月，服药前低下的淋巴细胞转化率即刺激指数由37±24升至72±38，巨噬细胞吞噬率由原来的37%±19%升至53%±10%，但不影响恶性肿瘤病人的NK细胞功能。在一项包括152例中、晚期癌症病人的多中心、前瞻性、双盲临床试验中，103例服OA片40 mg、tid，共1～2月。结果与安慰剂对照组(49例)比较，OA组病人的免疫功能明显改善，如巨噬细胞吞噬率由37.9%提高到49.0%，E-玫瑰花结形成率由42.8%提高到48.2%，迟发超敏反应(旧结核菌素试验)也明显提高。多数病人服OA后一般状况好转，食欲增进，血红蛋白、白细胞和血小板数上升率分别为63%、75%和79%，且无明显副作用和肝、肾功能异常[53]。, http://www.100md.com(张明发 沈雅琴)