HPLC法同时测定重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液的含量及有关物质(2)
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参见附件。
2.4 系统适用性试验
取重酒石酸去甲肾上腺素对照品10 mg，加0.1 mol/L盐酸5 ml使溶解，取1 ml，加30%过氧化氢溶液0.1 ml，摇匀，在紫外光灯(254 nm)下照射90 min，加流动相9 ml，摇匀，作为系统适用性试验溶液[3]。取系统适用性试验溶液20 µl，注入液相色谱仪，除主成分峰外，应有相对保留时间1.2和1.5的两个降解峰，主峰与两个降解产物之间的分离度均应符合要求。理论板数按去甲肾上腺素峰计算不低于2 000(图1)。
2.5 专属性试验
分别取空白辅料溶液及“2.1”项下的两种注射液的供试品溶液、对照品溶液各20 µl，进样，结果表明空白辅料不干扰重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液的含量测定。见图2、3。
2.6 线性关系及范围
分别精密称取重酒石酸去甲肾上腺素适量，按“2.1 2)”配制成约80、128、160、192、256、320 μg/ml的溶液，按“2.3”项下测定，记录色谱图。以重酒石酸去甲肾上腺素峰面积(X)对其质量浓度(Y，mg/ml)进行回归，得重酒石酸去甲肾上腺素肾上腺素回归方程为：Y=9.350×103X-113.2，r=0.999 8。结果表明重酒石酸去甲肾上腺素在80～320 μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。
分别精密称取盐酸去氧肾上腺素适量，按“2.2 2)”配制成约100、160、200、240、320、400 μg/ml的溶液，按“2.3”项下测定，记录色谱图。以盐酸去氧肾上腺素峰面积(X)对其质量浓度(Y，mg/ml)进行回归，得盐酸去氧肾上腺素回归方程为：Y=28.65+8.126×103X，r=0.999 6。结果表明盐酸去氧肾上腺素在100～400 μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。
2.7 检测限的考察
按信噪比3:1测得重酒石酸去甲肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素的最小检测限分别为152.3 ng/ml和103.8 ng/ml。
2.8 精密度试验
配制含量测定供试品溶液共6份，分别进样20 µl，重酒石酸去甲肾上腺素注射液的标示量RSD值为0.20%；盐酸去氧肾上腺素注射液的标示量RSD值为0.65%。
2.9 回收试验
按处方量的80%、100%、120%并分别按“2.1”和“2.2”配制128、160、192 μg/ml的重酒石酸去甲肾上腺素溶液和160、200、240 μg/ml的盐酸去氧肾上腺素溶液，按照“2.3”项下方法测定，计算得重酒石酸去甲肾上腺素的平均回收率为101.2%，RSD值为0.18%(n=9)；盐酸去氧肾上腺素的平均回收率为98.1%，RSD值为0.051%(n=9)。
2.10 含量测定
取对照品溶液、供试品溶液各20 µl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。将重酒石酸去甲肾上腺素注射液三批和盐酸去氧肾上腺素注射液三批含量测定结果分别与《中国药典》2010年版方法比较，差异不大(表1、2)，但方法更简便。
2.11 有关物质的测定
精密量取系统适用性试验溶液、供试品、有关物质对照品溶液与对照溶液各20 µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有与肾上腺素峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过重酒石酸去甲肾上腺素标示量的1.0%；扣除溶剂与辅料峰，与辅料峰相邻的最大色谱峰不得大于对照溶液主峰面积的10倍(10.0%)；其他单个杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的0.5倍(0.5%)，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)(表3、图4)。
取供试品溶液、对照溶液各20 µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液如显杂质峰，除溶剂与辅料峰外，单个杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的0.5倍(0.5%)，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液的峰面积(1.0%)(表4、图5)。
2.12 重酒石酸去甲肾上腺素与盐酸去氧肾上腺素的同时测定
取重酒石酸去甲肾上腺素注射液与盐酸去氧肾上腺素注射液供试品溶液各1 ml与6 ml，混匀，进样20 µl，结果去甲肾上腺素与去氧肾上腺素两峰分离效果良好(图6)。
3 讨论
经实验，本法简单易行，精密度高，优于中国药典法，可同时检验重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液。
紫外扫描图显示重酒石酸去甲肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均在280 nm波长有最大吸收，因此选择280 nm波长作为检测波长。
重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素，光照、高温破坏后降解产物较少，酸、碱、氧化破坏后均产生大量降解产物。但主成分与降解产物的分离度均符合要求，不干扰重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液含量及有关物质测定。
美国药典34版对重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液均未进行有关物质考察[4,5]。重酒石酸去甲肾上腺素分子结构中具有儿茶酚(邻苯二酚)结构，性质不稳定，接触空气或受日光照射，极易被氧化变质，故制成注射液需加入焦亚硫酸钠作为抗氧剂。但焦亚硫酸与邻苯二酚易生成磺化物，且通过本文所研究的色谱方法可对该磺化物进行分析，但还须对该磺化物生成过程进行进一步研究确认，且在有必要时应进行相关的药理毒理研究。而盐酸肾上腺素分子结构中只有一个酚羟基，在其制剂处方中添加抗氧剂后 ......
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