婴儿双歧杆菌冻干保护剂配方的筛选与优化(2)
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试验方法
菌种活化、传代与接种：选用血琼脂平板培养基活化保藏的菌种，置于37 ℃厌氧培养48 h，挑单菌落制备疱肉管。
种子液制备：将培养好的疱肉管接种于400 ml种子培养液中，在37±1 ℃条件下培养12～18 h，按10 %接种量接种至4 L种子培养液中，在37±1 ℃条件下培养12～18 h。
菌粉的制备：将培养好的种子液按10 %接种量接种于50 L发酵罐中，在37±1 ℃，搅拌转速180 r/min条件下发酵培养8～10 h;发酵菌液于4 ℃、10 000 r/min离心15 min，去掉上清液得菌体;然后根据离心获得的菌体重量，按菌泥保护剂1∶1的比例，依次加入各类冻干保护剂，混匀后置于真空冷冻干燥机-38 ℃预冻5 h，再冷冻干燥约33 h，期间程序升温至30 ℃，出箱后即得冻干菌粉，并检测有效活菌数。
活菌数测定：采用血琼脂平板计数法，梯度稀释至约20～160个菌/ml后涂平板，置于37±1 ℃培养箱中厌氧培养48 h后计数;同时，用营养琼脂培养基进行杂菌检测。
冻干存活率计算方法：冻干菌粉活菌数/加混合保护剂冻干前的活菌数×100%。
结果与讨论
冻干保护剂的选择
大分子保护剂的选择与优化
真空冷冻干燥过程中，冷冻和干燥两个过程会造成部分微生物细胞的损伤、死亡以及某些酶蛋白分子的钝化，选择有效的保护剂是解决这一问题的技术关键。不同的保护剂在冷冻干燥过程中发挥着不同的作用，大分子类保护剂主要在细胞表面起保护层作用，防止细胞受损。脱脂奶粉能稳定细胞膜，提供细胞保护衣以免细胞受到损伤。它不管单独使用还是与其他保护剂混合使用均具良好效果。一些大分子物质如淀粉、麦芽糊精等，对菌体也具有较好的非渗透保护作用。为此，对10%含量的脱脂奶粉、淀粉和麦芽糊精进行筛选(表1)，结果表明，麦芽糊精的保护效果最差，而脱脂奶粉的保护效果优于淀粉 ......
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