1.2 检测方法

    1) 试剂与仪器。鼠抗人HIF-1a单克隆抗体、鼠抗人COX-2单克隆抗体、免疫组化试剂盒、HE染色试剂盒(型号：BS115-SJH，中国武汉博士德公司)、DAB显色剂、PBS缓冲液(北京中杉生物技术有限公司)、中性树胶(产品编号：CW0128，北京康为世纪生物科技有限公司)、Zeiss Axioskop显微镜(德国)、Thermo scientific全自动封片机(英国)。

    2) 操作步骤。采用免疫组化方法检测HIF-1a、COX-2表达，术中采集直肠癌组织标本和癌旁正常直肠组织(直肠癌边缘外>6 cm)标本，甲醛固定石蜡包埋，连续4 μm切片，60 ℃烤片1 h，二甲苯脱蜡3次，每次5 min，浸入无水乙醇、85%乙醇和75%乙醇各5 min，进入蒸馏水5 min水化；采用柠檬酸修复工作液对石蜡切片进行高压修复，修复工作液加入高压锅中，待修复切片浸入修复液中，盖上压力锅盖，加热至均匀喷气，2 min后压力锅离开热源，自动冷却至室温 ......