1.2 方法

    1.2.1 细胞培养扩增

    从液氮罐中取出一管克隆细胞株，立即浸入37 ℃的水浴中，不断搅动，使之迅速融化。用75%酒精擦拭其外部，于超净工作台用无菌移液管将细胞悬液转移至装有30 ml I/F/D培养基(含300 μl双抗)的125 ml摇瓶中，置于Infors Minitron培养箱于37 ℃、5% CO2、120 r/min的条件下振荡培养3 d后细胞计数，以5.0×105的细胞密度接种至装有新鲜30 ml培养基的125 ml摇瓶，同上培养5 d，离心(4 ℃，200 g)10 min后取上清测定其rhEPO-Fc融合蛋白的体外活性。

    1.2.2 单因素细胞培养实验

    在I/F/D基础培养基中分别添加不同浓度的F68、维生素、腐胺、乙醇胺或胰岛素，培养5 d后考察它们单独或组合对rhEPO-Fc的体外活性的影响。自维生素开始，分别在前一试验优化的基础上再添加所需试验的组分 ......