屋尘螨变应原对人肥大细胞脱颗粒的影响(2)

http://www.100md.com 2016年5月1日 《上海医药》2016年第9期

     HMC-1细胞接种于75 cm2培养瓶内，用细胞培养液[0%(v/v)胎牛血清(FBS)，20 mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，0.01%(v/v)硫代甘油，2 mmol/L L-谷氨酰胺，链霉素和1%青霉素]于37 ℃、5%(v/v) CO2、湿度为95%的无菌环境培养箱中培养。收集对数生长期的细胞，经20 g/L多聚甲醛固定30 min后用含10 g/L BSA的PBS洗涤FITC标记的羊抗鼠PAR2 mAb以及同型对照4 mg/L 37 ℃ 孵育1 h 。抗体标记后细胞用含10 g/L BSA的PBS洗涤2次，重悬细胞以流式细胞术检测肥大细胞PAR2表达。

    1.3 人肥大细胞HMC-1培养与激发[4]

    收集对数生长期的细胞，用血球计数板计数， 6孔板每孔5×105，设3个重复，用5 μg/ml Derp1、100 μmol/L SLIGRL-NH2、100 μmol/L LRGILS-NH2及100 μmol/L FSLLY+5 μg/ml Derp1分别处理细胞 ......