新型流感病毒快速实验室鉴定研究进展(2)
本文重点介绍采用组合应用不同高通量分子诊断技术的策略,直接从临床标本入手,快速鉴定新型甲型流感病毒的技术流程。该流程包括三个步骤:流感病毒病毒诊断、甲型流感病毒分型和新型流感病毒鉴定(图1)。
1 甲型流感病毒检测
1.1 核酸检测
流感病毒与鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒等10多种病原体引发的呼吸道感染临床症状极为相似且流行季节重叠。因此,对急性呼吸道感染患者的临床标本(鼻咽擦拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液)需要进行流感病毒和其他已知常见呼吸道病原体初步筛查。筛查采用分子检测方法,以不同病毒基因各自高度保守序列为靶序列,设计一系列引物和探针,各个单重PCR扩增产物通过片段大小或荧光信号筛查阳性标本[7-8]。
以Luminex和Perkin Elmer公司分别研发的“液相悬浮芯片”、BioFire公司研发的FilmArray等为代表的高通量病原体核酸检测技术,采用多重PCR或多重实时荧光PCR扩增病毒核酸,再结合下游不同杂交技术的策略[9-10]。与传统单个病原体特异性PCR相比,这些技术一次可同时检测10多种甚至几十种病原 ......
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