关于起草《自体CAR-T免疫细胞产品生产指南(讨论稿)》的思考(3)
2.3.1 质粒生产过程(如有)
质粒生产以复苏携带质粒的工程菌为起始点，经细菌扩增，收获细菌，裂解、破碎菌体后释放质粒，去除相关细菌蛋白和细菌基因组，去除细菌内毒素，纯化得超螺旋质粒，最后除菌过滤获得质粒中间品。
2.3.2 病毒载体生产过程
病毒载体的生产过程如下：扩增生产细胞至一定规模(如采用瞬转工艺，则需投入质粒和转染复合物以包装出目的病毒)，收获病毒上清液，经纯化和去除牛血清白蛋白、DNA和蛋白等杂质后，浓缩至一定滴度，最后除菌过滤获得病毒载体中间品。
2.3.3 CAR-T产品生产过程
CAR-T产品的生产需先获取供者或患者的免疫细胞，经分离、分选(如有)获得T细胞，激活后再使用病毒载体感染T细胞，扩增生产至一定量，收获CAR-T并清洗。
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2.3.4 非冷冻制剂生产过程
在清洗后的CAR-T中加入生理盐水或其他药用辅料，分装至输血袋。
2.3.5 冷冻制剂生产过程
加入冷冻保护剂，分装至冻存袋，从室温冷冻至液氮温度后保存。
2.4 物料
2.4.1 质量标准和标识
参照《中华人民共和国药典》2015年版三部生物制品通则中“生物制品生产用原材料及辅料质量控制规程”对生物制品生产过程中使用的原材料和辅料质量控制的通用性要求。
2.4.1.1 血液样本唯一识别码
供者或患者体细胞的获得应符合伦理学要求，体细胞从入库至生产、检定应编制唯一识别码，并使用该识别码作为对应来源的唯一凭证，同时必须保护隐私信息。
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2.4.1.2 物料供应商管理
物料供应商应提供物料质量证明文件或合格证，部分进口试剂和耗材应有进口许可文件。
2.4.2 物料和产品的接收
同《药品生产质量管理规范(2010年修订)》附录3中“生物制品”的要求。
2.4.3 生产过程中的物料管理
同药品GMP，注意质粒(如有)和病毒载体的留样。
2.4.4 检验与放行
2.4.4.1 CAR-T制剂的快速检验与放行
应制定有条件放行的质量标准，以备临床急需。应将重点放在安全性检测项目方面，如无菌检查、支原体检查和病毒自我复制能力检查等。
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2.4.4.2 CAR-T制剂的标准检验与放行
应制定适用的检验方法与放行质量标准。
2.4.5 包装和运输储存
CAR-T制剂的外包装上应明确患者的相关信息，外包装材料宜选用保温隔热材料。
如CAR-T制剂保存在液氮中，应注意避免不同批次和不同供者来源的制剂混淆及相互污染，同时对液氮储存条件进行适当的监测。CAR-T制剂运输时应保存在液氮或干冰中，应测试运输条件的稳定性，运输过程中也应对温度进行持续的监测。
在CAR-T制剂出库发货时应核对其唯一识别码，并建立医疗机构接收回执，内容至少包括制剂袋外观检查、输液口完整性检查、接收时间及数量等。
2.5 确认和验证
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2.5.1 无抗生素培养无菌工艺模拟验证
在CAR-T产品的生产过程中应进行无抗生素培养无菌模拟工艺验证，以证明生产体系的无菌性、无支原体性。验证时宜选用生产用培养基、缓冲液或增菌培养基等模拟最优和最差培养环境，以验证CAR-T产品的无菌性。
2.5.2 总体工艺验证
通常情况下，工艺验证应至少包括常规生产条件下的三个连续批。如使用其他批数量，应考虑可否通过使用标准生产方法、已有相似产品或工艺、起始物料的可变性、临床适应证等予以合理解释。
对多种质粒生产系统，如生产工艺相同，基于风险评估，可只对其中一种质粒中间品进行工艺验证，结果需符合质粒中间品的质量标准。
CAR-T产品的生产可使用不同来源的T细胞，但结果均需符合CAR-T产品的质量标准。
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2.5.3 清洁验证
2.5.3.1 质粒纯化系统(如有)
质粒的纯化系统如为非一次性系统，应进行清洁验证。
2.5.3.2 病毒载体纯化系统
病毒载体的纯化系统如为非一次性系统，应进行清洁验证。
2.5.3.3 CAR-T产品纯化系统
CAR-T产品的纯化系统如为非一次性或非全封闭系统，清洁验证应验证细菌、真菌、分枝杆菌和支原体等项目，以避免交叉污染。如同一个CAR-T产品纯化车间涉及不同种的病毒载体，应进行批间清洁，并对清洁效果进行病毒载体去除验证。
2.6 关键控制项目
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病毒载体滴度：病毒载体滴度的检测方法应经验证，确定感染复数范围，确保感染效率符合质量标准。
T细胞占比和T細胞数：对来源于供者的外周血细胞，经分离、分选(如有)获得T细胞群后，应检测其中的T细胞占比和T细胞数。
CAR-T的CAR+占比：病毒感染72 h后，一般宜检测CAR-T的CAR+占比，因为CAR-T在扩增过程中其CAR+占比可能会下降，导致CAR-T产品的CAR+占比不符合质量标准。
3 挑战与思考
3.1 认知的时代性
本生产指南是主要基于目前的认知提出的有关CAR-T类免疫细胞产品良好生产规范方面的一般考虑。随着相关技术发展、认知提高和经验积累，对这类产品生产规范方面的认识必会更加深入、细化和提高。
3.2 个体化治疗产品的特殊性
CAR-T类免疫细胞产品属个体化治疗产品，来源于不同供者的T细胞给生产工艺的标准化和产品的一致性带来了极大的挑战，决定了这类产品在生产的不同工序阶段可能存在着不同的工艺控制路径。因此，相对于传统药品的管理，如何保证这类产品的安全、有效和质量可控具有极大的挑战性。, 百拇医药(王冲 付秋雁 谭建新 于玲莉 刘芬 董正龙 李建平)
质粒生产以复苏携带质粒的工程菌为起始点，经细菌扩增，收获细菌，裂解、破碎菌体后释放质粒，去除相关细菌蛋白和细菌基因组，去除细菌内毒素，纯化得超螺旋质粒，最后除菌过滤获得质粒中间品。
2.3.2 病毒载体生产过程
病毒载体的生产过程如下：扩增生产细胞至一定规模(如采用瞬转工艺，则需投入质粒和转染复合物以包装出目的病毒)，收获病毒上清液，经纯化和去除牛血清白蛋白、DNA和蛋白等杂质后，浓缩至一定滴度，最后除菌过滤获得病毒载体中间品。
2.3.3 CAR-T产品生产过程
CAR-T产品的生产需先获取供者或患者的免疫细胞，经分离、分选(如有)获得T细胞，激活后再使用病毒载体感染T细胞，扩增生产至一定量，收获CAR-T并清洗。
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2.3.4 非冷冻制剂生产过程
在清洗后的CAR-T中加入生理盐水或其他药用辅料，分装至输血袋。
2.3.5 冷冻制剂生产过程
加入冷冻保护剂，分装至冻存袋，从室温冷冻至液氮温度后保存。
2.4 物料
2.4.1 质量标准和标识
参照《中华人民共和国药典》2015年版三部生物制品通则中“生物制品生产用原材料及辅料质量控制规程”对生物制品生产过程中使用的原材料和辅料质量控制的通用性要求。
2.4.1.1 血液样本唯一识别码
供者或患者体细胞的获得应符合伦理学要求，体细胞从入库至生产、检定应编制唯一识别码，并使用该识别码作为对应来源的唯一凭证，同时必须保护隐私信息。
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2.4.1.2 物料供应商管理
物料供应商应提供物料质量证明文件或合格证，部分进口试剂和耗材应有进口许可文件。
2.4.2 物料和产品的接收
同《药品生产质量管理规范(2010年修订)》附录3中“生物制品”的要求。
2.4.3 生产过程中的物料管理
同药品GMP，注意质粒(如有)和病毒载体的留样。
2.4.4 检验与放行
2.4.4.1 CAR-T制剂的快速检验与放行
应制定有条件放行的质量标准，以备临床急需。应将重点放在安全性检测项目方面，如无菌检查、支原体检查和病毒自我复制能力检查等。
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2.4.4.2 CAR-T制剂的标准检验与放行
应制定适用的检验方法与放行质量标准。
2.4.5 包装和运输储存
CAR-T制剂的外包装上应明确患者的相关信息，外包装材料宜选用保温隔热材料。
如CAR-T制剂保存在液氮中，应注意避免不同批次和不同供者来源的制剂混淆及相互污染，同时对液氮储存条件进行适当的监测。CAR-T制剂运输时应保存在液氮或干冰中，应测试运输条件的稳定性，运输过程中也应对温度进行持续的监测。
在CAR-T制剂出库发货时应核对其唯一识别码，并建立医疗机构接收回执，内容至少包括制剂袋外观检查、输液口完整性检查、接收时间及数量等。
2.5 确认和验证
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2.5.1 无抗生素培养无菌工艺模拟验证
在CAR-T产品的生产过程中应进行无抗生素培养无菌模拟工艺验证，以证明生产体系的无菌性、无支原体性。验证时宜选用生产用培养基、缓冲液或增菌培养基等模拟最优和最差培养环境，以验证CAR-T产品的无菌性。
2.5.2 总体工艺验证
通常情况下，工艺验证应至少包括常规生产条件下的三个连续批。如使用其他批数量，应考虑可否通过使用标准生产方法、已有相似产品或工艺、起始物料的可变性、临床适应证等予以合理解释。
对多种质粒生产系统，如生产工艺相同，基于风险评估，可只对其中一种质粒中间品进行工艺验证，结果需符合质粒中间品的质量标准。
CAR-T产品的生产可使用不同来源的T细胞，但结果均需符合CAR-T产品的质量标准。
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2.5.3 清洁验证
2.5.3.1 质粒纯化系统(如有)
质粒的纯化系统如为非一次性系统，应进行清洁验证。
2.5.3.2 病毒载体纯化系统
病毒载体的纯化系统如为非一次性系统，应进行清洁验证。
2.5.3.3 CAR-T产品纯化系统
CAR-T产品的纯化系统如为非一次性或非全封闭系统，清洁验证应验证细菌、真菌、分枝杆菌和支原体等项目，以避免交叉污染。如同一个CAR-T产品纯化车间涉及不同种的病毒载体，应进行批间清洁，并对清洁效果进行病毒载体去除验证。
2.6 关键控制项目
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病毒载体滴度：病毒载体滴度的检测方法应经验证，确定感染复数范围，确保感染效率符合质量标准。
T细胞占比和T細胞数：对来源于供者的外周血细胞，经分离、分选(如有)获得T细胞群后，应检测其中的T细胞占比和T细胞数。
CAR-T的CAR+占比：病毒感染72 h后，一般宜检测CAR-T的CAR+占比，因为CAR-T在扩增过程中其CAR+占比可能会下降，导致CAR-T产品的CAR+占比不符合质量标准。
3 挑战与思考
3.1 认知的时代性
本生产指南是主要基于目前的认知提出的有关CAR-T类免疫细胞产品良好生产规范方面的一般考虑。随着相关技术发展、认知提高和经验积累，对这类产品生产规范方面的认识必会更加深入、细化和提高。
3.2 个体化治疗产品的特殊性
CAR-T类免疫细胞产品属个体化治疗产品，来源于不同供者的T细胞给生产工艺的标准化和产品的一致性带来了极大的挑战，决定了这类产品在生产的不同工序阶段可能存在着不同的工艺控制路径。因此，相对于传统药品的管理，如何保证这类产品的安全、有效和质量可控具有极大的挑战性。, 百拇医药(王冲 付秋雁 谭建新 于玲莉 刘芬 董正龙 李建平)