腺病毒生产工艺改进(2)
2)用颗粒数检测和病毒活性检测(TCID50)来观察改进后单批次病毒的产量及活性变化[5]。2 结果
生物反应器在灭菌后将通气量设定在0.4 L/min。当将系统溶氧值设定在50%时,系统会利用外接的空气、氧气、氮气自动调节系统内的溶氧状态,使之达到设定的溶氧值(50%)。由于内部没有细胞生长,达到平衡后,此时三种气体的用量占比(总流量是0.4 L/min)是固定值,正常情况下此时氧气用量是0,由空气和氮气相互混合控制体系内的溶氧值。当接种细胞后,随着细胞生长耗氧,氮气的用量逐步下降,遂开始用氧。由于系统内除293细胞外,没有其他生物体代谢耗氧,所以可通过氧气用量占比判断系统内细胞生长情况。用氧占比高表明系统内活细胞数量大;反之,系统内活细胞数量少。
用改进后的方法连续生产7批次,收集每批次感染病毒后系统每天的用氧情况,取均值,与之前生产的11个批次对应的数据比较(图1)。
结果表明,改进后的工艺从第4天开始,用氧量的下降趋势明显小于改进前,并且用氧量回归到系统生产前调试阶段时初始值的时间平均比改进前延后了24 h,表明在之后相同的培养时段,改进后系统内的活细胞数量多于改进前,并有延迟凋亡的迹象。
用改进后的方法连续生产7批次 ......
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