荧光定量PCR仪、荧光显微镜和自动酶联免疫分析仪(均由上海市普陀区中心医院中心实验室提供)。

    1.2 方法

    1.2.1 慢病毒干擾载体的构建

    针对目的基因CHI3L1基因，应用公用网站中提供的RNA干扰序列(XM 005244857.1 PREDICTED： Homo sapiens chitinase-3-like l， mRNA)设计原则，设计多个RNA干扰靶点序列，然后根据设计经验和设计软件进行测定、评估，选择具有最佳动力学参数的干扰靶点序列进入后续实验流程。根据CHI3L1基因分别设计并合成3对短发卡RNA(short hairpin RNA， shRNA)寡聚单链DNA，退火成双链RNA，再将此3对双链RNA的shRNA寡聚单链DNA序列的5’ to 3’序列分别插入至shRNA慢病毒载体中，构建出3个shRNA慢病毒重组质粒，并转化至DH5α感受态细胞中，最后成功构建成pGMLV-SC1 RNAi慢病毒载体 ......