1.2 实验方法

    1.2.1 发酵方法

    斜面培养：将甘油管中保藏的菌种于无菌操作下转接于斜面培养基中，于恒温恒湿培养箱中26 ℃培养5 d。

    种子培养：将斜面菌种于无菌操作下，刮取孢子并转移至无菌生理盐水中悬浮，按照10%接种量转接于种子培养基中，在恒温摇床中(26 ℃，180 r/min)培养24 h。

    发酵培养：将获得的种子培养液，于无菌操作下按照10%的接种量转接于发酵培养基中，在恒温摇床中(26℃，180 r/min)培养40 h。

    1.2.2 甲壳素提取

    菌体破壁处理：发酵液抽滤取滤渣，按照质量体积比，加入菌体湿重3倍的HCl溶液(质量分数为1.8%)，搅拌破壁处理1 h，用NaOH溶液调节pH至6.0，抽滤取滤渣，用纯化水清洗滤渣至中性。滤渣用无水乙醇脱水2次后，置于烘箱中45 ℃烘干至恒重，获得干菌丝体。

    酸处理：比较酸浓度、酸处理时间、酸处理温度和固液比对灰分去除和蛋白质含量的影响[10]。

    碱处理：比较碱浓度、碱处理温度、碱处理时间、固液比对蛋白质去除和收率的影响[10] ......