1.3 菌株鑒定与药敏试验

    菌株经Del96Ⅱ全自动细菌鉴定仪鉴定和药敏分析。

    1.4 基因扩增

    从GenBank寻找并下载tem-1、tem-2 和tem 基因序列，通过DNA序列比对找到其共有序列，并设计引物：P1：5’-GAGTATTCAACATTTCCGTGTC-3’，P2： 5’-TAATCAGTGAGGCACCTATCTC-3’ ，扩增片段长度为535 bp。PCR扩增试剂购自中山大学达安基因股份有限公司，引物合成也委托其完成。

    质粒的提取：参照UNIQ-10柱式小量抽提试剂盒提取细菌质粒DNA [3]。

    PCR反应体系：10 ml DNA模板，25 ml 2×MasterMix， tem-1或tem-2上下游引物各2 ml，Taq DNA聚合酶(5 U/ml)0.5 ml，加ddH2O至50 ml。PCR扩增条件：95 ℃预变性 5 min，然后95℃ 1 min，65℃ 30 s，72 ℃ 1 min，循环35次 ......