毛文学 余音 李欣钰 余丹丹

    (上海研诺医药科技有限公司 上海 201114)

    两性霉素B(AmB)是一种多烯类广谱抗真菌抗生素，是治疗敏感深部真菌感染的首选药物之一[1-3]，但AmB 的作用机制决定了其在破坏真菌细胞的同时也会导致人体正常细胞损伤，影响细胞膜的运输，长期使用还会造成肾损伤及循环系统的损伤，表现出蛋白尿、氮质血症、低血钾、贫血等症状[4]。Kagan 等[5]在研究AmB制剂时以酵母细胞为模型，通过酵母的存活率和细胞内K+浓度来评价AmB 制剂及AmB-阿拉伯半乳聚糖共轭物(AmB-arabinogalactan conjugate，AmB-AGC) 联合用药的毒性变化。Gruda 等[6]以红细胞中K+的保留量为指标，证明蔗糖单月桂酸酯能够在不降低AmB 抑制真菌能力的同时消除其对红细胞的毒性。de Araújo 等[7]的研究表明AmB 胶束对红细胞的毒性与K+的泄漏呈浓度依赖性。

    国内外诸多围绕AmB 剂型改良、联合用药及拓展应用的研究都以其毒性为重要评价指标[8-10]，利用AmB增加细胞膜通透性导致单价阳离子泄漏的特点，以泄漏的K+含量表征AmB 制剂毒性。在其他相关研究中，K+含量的测定多使用火焰光度计、原子吸收分光光度计、电解质分析仪及生化分析仪等设备[7,11-12]。实验结果的精确度会受设备及样本处理方法等因素的影响，如火焰光度计无法测出元素的绝对浓度值，而生化分析仪由于样本处理中使用肝素抗凝剂，会影响静脉血清K+测定，导致测得的K+含量偏高。本研究选择红细胞为载体，以HPLC 法对红细胞渗漏的K+浓度进行检测，建立了一套针对AmB 制剂的毒性评价方法。此方法能够准确高效地评价工艺及处方对细胞毒性的影响，为AmB 制剂的研究应用拓宽了道路。

    1 材料和方法

    1.1 材料与试剂

    10%大鼠红细胞(批号：BC20200809、BC20200813、BC20200818 ......