卵巢癌组织中肿瘤浸润淋巴细胞分布特征与患者预后的关系(1)
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2010年5月1日
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【摘要】目的:探讨卵巢癌组织中肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TIL)的分布及其与患者预后的关系。方法:应用免疫组织化学MaxVisionTM方法检测卵巢癌、良性卵巢上皮性肿瘤和正常卵巢组织中的CD4+、CD8+细胞数,及它们与临床、病理特征及卵巢癌预后的相关性。结果:①卵巢癌组织中CD4+、CD8+中位数分别为12.5/HPF和57/HPF,与良性和正常对照组相比差异有显著性意义。②卵巢癌组织癌巢内CD4+、CD8+细胞数和CD4+/CD8+比值显著低于间质内;不同组织类型之间癌巢内CD4+和间质内CD4+、CD8+细胞数差异存在显著性意义。③Ⅲ期患者癌巢内CD8+和间质内CD4+、CD8+细胞数显著高于Ⅰ～Ⅱ期,而癌巢和间质内的CD4+/CD8+比值显著低于Ⅰ～Ⅱ期;低分化患者间质内CD8+细胞数显著高于高分化者,而癌巢和间质内的CD4+/CD8+比值显著低于高分化者。④癌巢CD4+/CD8+比值较高组(≥0.095)比CD4+/CD8+比值较低组(<0.095)生存率高,经Log-rank检验,差异有显著性(P<0.05)。Cox回归模型多因素分析提示:癌巢CD4+/CD8+比值是影响卵巢癌预后的独立因素。结论:①卵巢癌组织中TIL数量增加,但主要分布于间质内,且与细胞分化、临床分期等参数有关。②卵巢癌TIL反映了卵巢癌患者局部抗瘤免疫状况,且与分期负相关,癌巢CD4+/CD8+比值可为预测卵巢上皮性癌预后的可靠指标。
【关键词】卵巢癌;肿瘤浸润淋巴细胞;免疫组织化学;预后
doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.05.101文章编号:1006-1959(2010)-05-1132-03
随着免疫学的进展,人们认为肿瘤的发生发展及预后不单取决于肿瘤本身的恶性程度,也取决于肿瘤的侵袭和宿主的抵抗互相作用。宿主的抵抗,主要是免疫反应,影响着患者的预后。机体抗肿瘤免疫反应是一个复杂的过程,而细胞免疫在其中起主要作用[1,2]。肿瘤与机体相互作用的局部微环境,特别是免疫微环境,对肿瘤的发生、发展和转移有着重要的影响[3]。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)是主要存在于肿瘤组织内的T细胞为主的一个异质性淋巴细胞群体,研究发现淋巴细胞浸入到肿瘤组织内是体内免疫系统对肿瘤的抵抗现象,肿瘤部位的淋巴细胞浸润程度愈高,患者预后愈好[4]。
TIL-T细胞均表达CD3[5~7],主要有CD3+CD4+细胞(辅助T细胞)和CD3+CD8+细胞(细胞毒性T细胞,CTL)两个亚群[8]。已有研究表明[9],在食管鳞形细胞癌中发现,只有癌结节中同时有CD4和CD8阳性细胞浸润的病例预后相对较好,两者联合评价才是一个独立的预后因素。随肾癌临床分期的升高,阳性T细胞总数(T-TIL)浸润程度却降低,作为反映机体免疫状况的总中心环节CD4+/CD8+比值,随肾癌分期升高逐渐降低[10],但对于卵巢癌TIL亚型与患者预后的关系研究报道较少。本实验就是通过免疫组化MaxVisionTM法检测TIL细胞的两种主要亚型CD4,CD8在卵巢癌巢内、间质中的数量和分布来评价卵巢上皮性癌的预后因素。
1.材料和方法
1.1 研究对象:从2005年1月至2009年12月在妇产科因上皮性卵巢癌接受初次治疗为手术的病例中选择,选取的病例均经组织学检查确诊;术前未接受化疗、放疗或其他辅助治疗,术后均经过以铂类为主的正规化疗6~8疗程,PC为主要方案;均有相对完整随访资料的或可电话随访到的,随访时间最长56个月,最短12个月;共选择32例作为研究对象。年龄28～79岁,中位年龄50岁。组织学类型:浆液性20例,粘液性12例;FIGO(2000)分期,Ⅰ期10例,Ⅱ期5例,Ⅲ期17例。选择同期经组织学确诊的良性卵巢上皮性肿瘤20例作为良性对照组。因良性妇科疾病非卵巢肿瘤而手术,组织学证实为正常卵巢组织的13例作为正常对照组。
1.2 研究方法。
1.2.1 标本处理。标本均来自本院病理科存档石蜡块。作4μm厚的连续切片4张,1张备用,余3张分别行CD4、CD8免疫组化和HE染色,由资深病理医师复阅切片确诊,所有玻片均经过APES防脱片预处理,50℃烘片2h。
1.2.2 免疫组化染色。CD4、CD8免疫组化按常规MaxVisionTM法染色、DAB显色。实验用鼠抗人CD8单克隆抗体和鼠抗人CD4单克隆抗体均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。二抗:MaxVisionTM试剂套盒和DAB酶底物显色试剂盒来自福建迈新公司。阳性对照采用扁桃体石蜡切片组织,阴性对照均以PBS代替一抗。
1.2.3 免疫组化结果判定。将切片置于Olympus显微镜下采用盲法进行观察,先在低倍镜下观察整张切片,随机选择3个高倍视野(400×)计数阳性细胞,并求平均值。将卵巢上皮性癌组织分成2个区域:癌巢和间质。分别计数癌巢和间质内的CD4、CD8阳性细胞总数。
1.2.4 统计学处理。非正态数据采用中位数和范围(全距);两组比较采用非参数检验方法:Mann-Whitney检验方法;3组比较采用非参数检验方法:Kruskal-Wallis检验方法,显著性水准α=0.05(双侧)。生存期为手术日期至死亡或终检日期,用Kaplan-Meier法描绘生存曲线,Log-rank法检验生存率差异,预后多因素分析采用Cox比例风险回归模型,统计年龄、分期、组织类型、及残存癌大小等因素与生存率相关状况。所有数据均用SPSS12.0统计软件包处理。
2.结果
2.1 卵巢癌组织中CD4+、CD8+的数量。卵巢癌组织中CD4+、CD8+数量均显著高于良性和正常对照组中CD4+、CD8+数量(P<0.05),良性对照组和正常对照组中CD4+、CD8+数量无显著性差异(P>0.05)(见表1)。
表1 卵巢癌组及对照组组织中CD4+、CD8+数量的比较
组别例数CD4+ ......
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