嘛呢止痛搽剂治疗颈肩腰腿痛机理的实验研究
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2010年5月1日
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【摘要】目的:探讨嘛呢止痛搽剂治疗颈肩腰腿痛的可能机理。方法:1.对损伤模型的治疗作用研究:将64只Wistar大鼠进行创伤性造模后随机分为假手术组、溶媒组、嘛呢止痛搽剂大、中、小剂量组和骨友灵搽剂组,并进行相应药物治疗,治疗30天后观察组织形态学的变化;2.镇痛作用研究:将60只小鼠测定痛域后局部脱毛并随机分为生理盐水组、5%高粱酒组、骨友灵搽剂组和嘛呢止痛搽剂大、中、小剂量组。热板法:脱毛区治疗相应药物治疗5天,于末次给药后15、30、60、90和120min分别测定各小鼠痛阈值,比较其变化;扭体反应:造模分组同热板法,相应药物治疗2次/日,各大鼠给药4d,于末次给药1h后,ip0.8%的醋酸。观察20min内各鼠的扭体次数。结果:嘛呢止痛搽剂大剂量可使损伤模型大鼠骨化作用增强,对损伤有明显治疗作用;能显著提高大鼠由热刺激所致疼痛的痛阈值;明显减少醋酸刺激所致扭体反应次数。结论:嘛呢止痛搽剂治疗颈肩腰腿痛的可能机理为增强骨化作用,提高患者的痛域。
【关键词】嘛呢止痛搽剂;机理;实验研究
doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.05.227 文章编号:1006-1959(2010)-05-1234-02
嘛呢止痛搽剂是在藏区治疗风湿寒性关节痛的验方嘛呢骨痹液的基础上进行改进后制成的外用搽剂,经临床观察该药对颈肩腰腿痛有较好的疗效。为了探讨其药效学机理,为开发该药提供理论基础和技术支持,我们进行了该药治疗颈肩腰腿痛的实验研究,现整理如下:
1.呢止痛搽剂对大鼠损伤模型的治疗作用
1.1 材料。
1.1.1 药品。嘛呢止痛搽剂:250ml/瓶,含生药量21g/瓶,由甘肃省中医药研究院提供。骨友灵搽剂(辽宁花源本溪三药有限公司)。高粱酒(38±1)°:成都大邑荣斗酒厂生产。
1.1.2 动物。Wistar大鼠,(200.3±31.4)g,♀♂兼用,有兰州医学院实验动物中心提供。大鼠合格证号:医动子第14-005号。
1.1.3 仪器。AO切片机:美国产品,Olympus显微镜:日本产品。
1.2 方法。
1.2.1 动物分组及给药。将大鼠随机分六组:假手术组(等容量NS)、溶媒组(等容量5%高粱酒)、嘛呢止痛搽剂大剂量组(0.105g/kg)、中剂量组(0.053g/kg)、小剂量组(g/kg)和骨友灵搽剂组(20ml/kg)均创伤局部搽药,每日3次,造模前连续创伤局部搽药7天。然后于造模后连续创伤局部搽药30天。
1.2.2 损伤模型制备。大鼠称重后,ip戊巴比妥钠麻醉(40mg/kg),置于仰卧位,体积显微镜下用15号刀切开左后肢膝关节内侧皮肤及股四头肌内侧肌肉,切口约为0.6~0.8cm,用显微外科弯镊提取该肌肉肌腱,暴露股骨下端内髁,用特制小刀轻轻刮去内髁上的部分关节软骨,长约4~6mm,注意确保仅刮除关节软骨层,未伤及软骨下骨组织,然后分层缝合伤口,术后肌肉注射青霉素钾盐3天,以防感染。实验动物除假手术组外,其余均按上述方法制备损伤模型,假手术组大鼠手术方法通商,但不刮削关节软骨。术后进行大体观察及组织形态学观察。
1.2.3 组织形态学观察。手术后一月,脱颈椎处死大鼠,取左后肢膝关节,10%福尔马林固定一周,5%硝酸脱钙15天,酒精逐级脱水,石蜡包埋,间断连续切片,片厚12um,每隔5张取1张,每个膝关节取8张切片裱于载玻片上。H.E染色,光镜下观察关节损伤处关节软骨的形态学改变。镜下,用测镜尺测量每个关节创伤下方5个骨小梁的宽度,经统计学处理进行比较。
1.3 结果。
1.3.1 大体改变及组织形态学改变。
1.3.1.1 大体改变。除假手术组外,其余所有动物于手术后均可见较明显的跛行,至术后3周,动物跛行不明显。
1.3.1.2 关节软骨结构及细胞形态改变。光镜可见,溶媒组(5%高粱酒)大鼠关节软骨病变较明显,表现为骨细胞分布稀疏,且见多数区域软骨细胞固缩或细胞核呈空泡变性,个别软骨囊显著扩大,骨小梁变细及潮线不规则。嘛呢止痛搽剂大、中、小剂量组及骨友灵搽剂组大鼠关节软骨病变均较溶媒组有不同程度减轻。同时还可见,嘛呢止痛搽剂大剂量组大鼠软骨细胞明显增生,且细胞体大,胞浆丰富,潮线消失,骨小梁增宽。其余三组除软骨细胞增生外,软骨细胞的数目及形态改变均不甚明显,假手术组大鼠关节软骨未见上述改变,软骨膜细胞排列整齐,软骨细胞的形态及分布正常,骨小梁疏密一致。
1.3.1.3 大鼠关节中骨小梁宽度测定。于光镜下,用测微尺测量每个关节创伤下方5个骨小梁宽度,结果表明。服用嘛呢止痛搽剂大、中、小剂量均可使创伤关节软骨下骨小梁宽度明显增加,大剂量组作用最明显,作用呈剂量依赖性增强。大剂量组与骨友灵搽剂组比较也有明显差异(p<0.01),结果(见表1)。
表1 给嘛呢止痛搽剂后对损伤模型大鼠骨小梁宽度值的影响(X-±S)um
组别剂量(g/kg)大鼠数(只)骨小梁宽度(um)
假手术--1337.23±5.34
5%高粱酒20ml/kg1131.29±8.60△△△
嘛呢止痛搽剂(大)0.1051255.72±7.10***
嘛呢止痛搽剂(中)0.05310☆46.32±10.39***
嘛呢止痛搽剂(小)0.02610☆☆39.96±8.36***
骨友灵搽剂20ml/kg848.93±7.55
与假手术组比较△△△P<0.01,与高粱酒组比较***P<0.01;嘛呢止痛搽剂大剂量组与骨友灵搽剂组比较☆☆☆P<0.01。
嘛呢止痛搽剂对大鼠损伤模型的治疗作用研究结果表明:嘛呢大剂量组大鼠软骨膜细胞、软骨细胞均有不同程度增生,且细胞体大,骨小梁明显增宽,显示嘛呢大剂量可使损伤模型大鼠骨化作用增强,对损伤有明显治疗作用,此作用比阳性对照药物骨友灵搽剂要强。
2.嘛呢止痛搽剂止痛实验研究
2.1 热板法。选择痛阈值在5~30s的合格小鼠60只,分为6组。分别为:生理盐水、5%高粱酒(20ml/kg)、骨友灵搽剂和嘛呢止痛搽剂大(0.105g/kg)、中(0.053g/kg)、小(0.026g/kg)剂量组。搽药前24小时,将大鼠背部脊柱两侧用脱毛剂脱毛,面积约4cmx5cm。24小时后。每鼠于给药前用热板仪测其痛阈值2次,取其平均值作为给药前痛阈值。连续在动物脱毛区涂抹相应的药5d,于末次给药后15、30、60、90和120min分别测定各小鼠痛阈值(超过60s按60s计)。从实验结果可以看出骨友灵搽剂和嘛呢止痛搽剂大、中剂量组均可提高热刺激所致疼痛的痛阈值。
2.2 对醋酸所致大鼠扭体反应的影响。取小鼠60只,♀♂兼用,分组参见2.1.1。创伤局部搽药,2次/日,各大鼠给药4d,于末次给药1h后,ip0.8%的醋酸(0.1ml/10g体重)。观察20min内各鼠的扭体次数,结果(见表2)。
注:t检验,与生理盐水组比较,*p∠0 ......
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