窿闭舒胶囊中补骨脂素和异补骨脂素含量分析(2)
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2010年5月1日
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参见附件(1505KB，2页)。
2.5.3 正交试验设计。根据预试结果,以氯仿与乙醇混合溶剂不同配比、溶剂用量、提取时间3个因素,每个因素3个水平,用L9(34)正交表进行正交试验,优选癃闭舒胶囊的提取工艺。提取效果通过测定补骨脂素与异补骨脂素的总含量进行考察,结果(见表1,表2)。
表1 因素水平表
水平A溶媒比例B溶媒用量(w/v)C提取时间(min)
13﹕7(氯仿:乙醇)1:2015
26﹕4(氯仿:乙醇)1:4030
3氯仿1:6045
表2 正交设计实验结果
试验号AB空列C总含量(mg/粒)
111111.44
212221.52
313331.68
421231.78
522311.71
623121.85
731322.04
832132.16
933212.19
k11.551.751.821.78
k21.781.801.831.80
k32.131.911.811.87
R1.750.460.060.28
(表2)的直观分析表明,影响提取效果的各因素作用主次为A>B>C,得到的最佳的提取工艺为A3B3C3。因此,本实验确定的最佳提取条件是选用氯仿为溶剂,提取溶媒用量为60倍,超声提取45min。
2.6 方法学考察。
2.6.1 精密度试验。分别吸取补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液,依次点于同一硅胶GF254薄层板上,按“样品测定”项下分离测定,结果补骨脂素吸光度的RSD=1.57%(n=6),异补骨脂素吸光度的RSD=1.84%(n=6),显示同板精密度良好。吸取补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液,依次点于6块硅胶GF254薄层板上,按上述条件展开测定,结果补骨脂素吸光度的RSD=1.73%(n=6),异补骨脂素吸光度的RSD=1.54%(n=6),显示异板精密度良好。
2.6.2 稳定性试验。精密吸取供试品溶液按上述条件薄层分离测定,在0、1、2、3、4、5h分别测定。结果显示补骨脂素和异补骨脂素在5小时内测定稳定,补骨脂素吸光度的RSD=1.13%(n=6),异补骨脂素吸光度的RSD=1.12%(n=6)。
2.6.3 重复性试验。取同一批癃闭舒胶囊20粒,倾出内容物,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于3粒的量),共6份,分别按“样品测定”分离测定。结果补骨脂素含量的RSD=1.78%(n=6),异补骨脂素含量的RSD=1.87%(n=6)。结果显示方法重复性良好。
2.6.4 加样回收率试验。取已知含量的同一批样品内容物约0.45g,共6份,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入补骨脂素对照液(0.720mg/mL)和异补骨脂素对照液(0.425mg/mL)适量,混匀蒸干,按照样品测定项下操作,按色谱条件进行测定。补骨脂素的平均加样回收率为100.3%,RSD=1.0%(n=6);异补骨脂素的平均加样回收率为99.3%,RSD=1.5%(n=6)。
2.7 样品测定。取癃闭舒胶囊样品10粒,倾出内容物,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于3粒的量),置于具塞锥形瓶中,加入氯仿,用量按料液比1:60加入。密塞,称定重量,超声45min,放冷,摇匀,滤过,蒸干,残渣用氯仿溶解,定容至5mL容量瓶中。分别吸取样品溶液、补骨脂素和异补骨脂素对照品液点于同一硅胶GF254薄层板上,点样量24?L,以正己烷-乙酸乙酯(8:2)展开10cm,取出,吹干,在紫外灯(254nm)下检视、定位,刮下与标准品斑点对应的硅胶粉末,同时刮取板上相应位置适量空白硅胶粉末,分别置5mL离心管中,精密加4mL无水乙醇,强烈振荡,使提取完全,离心10min(3000r•min-1),以空白硅胶粉末离心管中的上清液为空白,分别在240nm和246nm波长处测定相应样品上清液的吸光度,结果(见表3)。
表3 样品测定结果(mg•粒-1)
批号补骨脂素异补骨脂素
0710010.4800.284
0711110.4620.264
3.讨论
实验曾考察不同薄层板、不同展开剂及不同展距对补骨脂素和异补骨脂素分离效果的影响,最后选用GF254板,展开剂正己烷-乙酸乙酯(8:2),展距10cm,展开效果较好,无需显色,在紫外灯下观察,补骨脂素和异补骨脂素能分离得较好,斑点清晰集中,Rf值适中 ......
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