基于GSN稳转肝癌细胞的转录组新基因研究(1)
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摘要：目的 凝溶胶蛋白(Gelsolin， GSN)是凝溶胶蛋白超家族的成员之一，被发现对肿瘤转移具有促进作用。本研究旨在构建GSN双标签慢病毒载体，发现GSN过表达肝癌SMMC7721细胞转录组新基因。方法 PCR扩增GSN cds全长片段，接入带FLAG-HA双重标签的PCDH-CMV-MCS-EFl-Puro慢病毒载体中，经测序鉴定的重组质粒，病毒包装后转染人肝癌细胞SMMC7721，嘌呤霉素筛选稳定表达细胞系；In-Cell Western(ICW)检测GSN在SMMC7721肝癌细胞中的表达，Ion proton测序系统对转染及未转染的肝癌细胞进行mRNA测序。结果 测序表明重组质粒DNA序列与NCBI检索到的GSN编码序列一致；ICW检测到稳定转染细胞中GSN蛋白的表达为未处理细胞的2.02倍(P<0.05)；转录组测序共发现差异表达新基因21个，其中上调表达基因12个，下调表达基因9个，6个基因上调和4个基因下调的绝对表达值倍数变化均>4。结论 基于GSN稳定表达的SMMC7721肝癌细胞株所发现的转录新基因，为研究GSN在肝癌中的作用机制开拓新方向。
关键词：GSN；SMMC7721；慢病毒载体；转录组；新基因
GSN是一个钙离子和二磷酸磷脂酰肌醇依赖性肌动调节蛋白，主要有细胞质型和分泌型两个亚型，在细胞骨架重塑、免疫反应及磷酸肌醇信号通路中发挥重要作用[1]。研究表明GSN与引发细胞凋亡蛋白酶级联反应蛋白酶之一半胱天冬酶-3(CPP-32)作用，参与细胞凋亡[2] ......
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