超氧化物歧化酶在Hcy诱导的THP—1单核细胞源性巨噬细胞中的抗氧化作用
同型半胱氨酸,THP-1单核细胞源性巨噬细胞,氧化应激,动脉粥样硬化
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摘要:目的 探讨超氧化物歧化酶(SOD)在Hcy诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞氧化应激中的作用。方法 THP-1单核细胞,加入佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞,然后加入100μmol·L-1的 Hcy 和100μmol·L-1 Hcy+叶酸+VB12,并设置对照组(0μM Hcy),孵育48h后收集细胞。采用Fe3+还原比色法检测总抗氧化能力(T-AOC)、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。结果 100μmol·L-1 Hcy组与对照组比较,T-AOC、SOD水平明显降低,MDA的含量明显升高;与100μmol·L-1Hcy+叶酸+VB12组比较,T-AOC、SOD水平升高,MDA的含量降低。结论 Hcy可诱发THP-1单核源性巨噬细胞发生氧化应激,SOD的活性下降且与MDA呈负相关,表明SOD在Hcy诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞中的抗氧化作用下降。
关键词:超氧化物歧化酶;同型半胱氨酸;THP-1单核细胞源性巨噬细胞;氧化应激;动脉粥样硬化
动脉粥样硬化(AS)是一种多因素诱导的慢性炎症性疾病,在其众多的致病因素中,氧化所致的损伤与AS的发生发展密切相关。同型半胱氨酸(Hcy)已被大量临床及循证医学证实是AS的一个重要的独立危险因子,Hcy致AS的确切机制仍然有待阐明,目前多数学者认为与Hcy致氧化应激毒性损伤有关。正常情况下,随着氧化代谢效率的提高,体内的抗氧化能力也不断增强,人体已经形成较为完善的抗氧化体系,即机体和细胞内活性氧的生成和清除处于一种动态平衡,当在某些因素的作用下这种平衡被打破,就形成了氧化应激。在机体抗氧化机制的研究中,超氧化物歧化酶(SOD)作用的发现具有重要意义。SOD催化超氧阴离子自由基的歧化反应,作为氧自由基清除的第一反应过程,在阻止自由基和脂质过氧化对机体的损害方面起关键性作用。因此,本研究通过体外培养THP-1单核细胞源性巨噬细胞,探讨SOD在Hcy诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞氧化损伤中的作用。
1资料与方法
1.1一般资料 THP-1单核细胞株来源于四川大学华西医学院;RPMI-1640培养基为GIBCO 公司产品;小牛血清,胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料研究所;同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸、维生素B12、佛波酯(PMA)为Sigma公司产品;总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所;BCA蛋白含量检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司 ......
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