esp1基因Tet-on载体的构建及在Hela中的可调控性表达(1)
esp1基因Tet-on载体的构建及在Hela中的可调控性表达,pTet-on,PTK-Hyg,esp1-pTRE-d2EGFP
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摘要：目的构建esp1- pTRE-d2EGFP可调控真核表达载体，检测其在Hela 细胞内的表达情况。方法将esp1导入pTRE-d2EGFP载体中。用脂质体将pTet-on、PTK-Hyg 和esp1-pTRE-d2EGFP共转染入Hela细胞, 以不同浓度的DOX诱导, 用Real-time PCR、Western blot检测esp1表达水平。结果我们构建的可调控性表达载体能在Hela细胞内表达, 不同浓度药物诱导的esp1表达水平明显不同。结论成功构建了esp1- pTRE-d2EGFP真核表达载体, 并可在Hela细胞内表达。为进一步观察esp1与肿瘤发生、发展的关系奠定了基础。
关键词：esp1；Hela ；pTet-on；PTK-Hyg ；esp1-pTRE-d2EGFP
中图分类号：R392.12 文献标识码：A
esp1基因表达一种分离酶(separase) 在遗传信息的传递中发挥重要作用。我们以esp1为靶基因构建一种可调控的真核表达载体, 以实现人为控制的esp1的表达[1，2]。本研究应用Tet-on系统调控esp1的表达，在低于DOX毒性剂量时就可以发挥诱导作用。其可控性、高表达效率和低表达背景特征，已成为研究基因功能、进行疾病基因治疗的有力武器[3]。为将来应用于动物模型, 方便快捷地研究分离酶在肿瘤细胞过度增殖中的机制奠定基础。
1资料与方法
1.1一般资料Hela，PSK-esp1质粒，pTet-on、PTK-Hyg 、pTRE-d2EGFP(购自Clontech 公司)，DMEM培养基(Hyclone美国)，小牛血清(兰州民海生物) ......
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