细菌鞭毛银染法技术
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摘要:本文介绍了细菌鞭毛银染法技术,对操作者鞭毛染色大有帮助,其染色效果十分理想,值得同行们借鉴学习。
关键词:细菌;鞭毛;银染法;培养基;玻片;染色
1资料与方法
1.1一般资料
1.1.1供试菌种 枯草杆菌(Bacillus subtilis).粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)由湖南师范大学微生物教室提供。
1.1.2培养基 配方组成:牛肉膏10 g,蛋白胨15 g,琼脂15 g,氯化钠5 g,蒸馏水1000 mL,pH 7.2。(牛肉膏、蛋白胨由杭州微生物试剂有限公司生产,琼脂由福建省石狮市宝双塔琼脂加工厂生产)。按上述配方配好培养基后,用干净试管分装包捆好,经高压灭菌摆斜面冷却凝固, 然后放入冰箱冷藏24 h,使斜面析出冷凝水,为供试菌活化提供斜面培养基。
1.2方法
1.2.1载玻片洗涤 新玻片的洗涤,用洗衣粉煮沸玻片1 h,然后用自来水冲洗干净,沥干后用95%的乙醇侵泡备用;用后玻片的洗涤,采取稀溶液洗涤法,将重铬酸钠或重铬酸钾50 g先溶解于850 mL自来水中,然后慢慢加热溶解,待冷却后除除加入100 mL浓硫酸,边加边搅动。此溶液氧化能力极强,具有极强的去油污作用。对处理玻片应放入溶液中加盖密封,(以防溶液氧化变质)。一般侵泡2 d取出冲洗干净,沥干后用95%的乙醇侵泡备用。如除污剂侵泡时间太长,会导致玻片变质不能使用。对划伤较严重的玻片,建议不要使用, 以免影响染色效果。
1.2.2供试菌活化 为增强细菌的活动力,将供试菌放在30℃的培养箱内连续培养活化五代(每代12 h)。然后将最后一代转接放入31℃培养箱内培养12 h,作为细菌鞭毛染色的最佳时期。
1.2.3菌种稀释孵育 取斜面活化菌种2~3环于盛有2 mL无菌水试管中,制成轻度浑浊的菌悬液,然后把试管直立于36℃水浴锅中孵育9 min,让菌体表面附着的鞭毛自然舒展游动。实验表明,细菌孵育5 min,只有部分鞭毛舒展游动,染色效果欠佳;孵育18 min菌体鞭毛染色明显很大,与真实细菌差异较大;超过25 min后鞭毛从菌体上自然脱落 ......
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