细菌鞭毛银染法技术
 |
| 第1页 |
参见附件。
摘要：本文介绍了细菌鞭毛银染法技术，对操作者鞭毛染色大有帮助，其染色效果十分理想，值得同行们借鉴学习。
关键词：细菌；鞭毛；银染法；培养基；玻片；染色
1资料与方法
1.1一般资料
1.1.1供试菌种 枯草杆菌(Bacillus subtilis).粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)由湖南师范大学微生物教室提供。
1.1.2培养基 配方组成：牛肉膏10 g，蛋白胨15 g，琼脂15 g，氯化钠5 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.2。(牛肉膏、蛋白胨由杭州微生物试剂有限公司生产，琼脂由福建省石狮市宝双塔琼脂加工厂生产)。按上述配方配好培养基后，用干净试管分装包捆好，经高压灭菌摆斜面冷却凝固, 然后放入冰箱冷藏24 h，使斜面析出冷凝水，为供试菌活化提供斜面培养基。
1.2方法
1.2.1载玻片洗涤 新玻片的洗涤，用洗衣粉煮沸玻片1 h，然后用自来水冲洗干净，沥干后用95%的乙醇侵泡备用；用后玻片的洗涤，采取稀溶液洗涤法，将重铬酸钠或重铬酸钾50 g先溶解于850 mL自来水中，然后慢慢加热溶解，待冷却后除除加入100 mL浓硫酸，边加边搅动。此溶液氧化能力极强，具有极强的去油污作用。对处理玻片应放入溶液中加盖密封，(以防溶液氧化变质)。一般侵泡2 d取出冲洗干净，沥干后用95%的乙醇侵泡备用。如除污剂侵泡时间太长，会导致玻片变质不能使用。对划伤较严重的玻片，建议不要使用, 以免影响染色效果。
1.2.2供试菌活化 为增强细菌的活动力，将供试菌放在30℃的培养箱内连续培养活化五代(每代12 h)。然后将最后一代转接放入31℃培养箱内培养12 h，作为细菌鞭毛染色的最佳时期。
1.2.3菌种稀释孵育 取斜面活化菌种2~3环于盛有2 mL无菌水试管中,制成轻度浑浊的菌悬液，然后把试管直立于36℃水浴锅中孵育9 min，让菌体表面附着的鞭毛自然舒展游动。实验表明，细菌孵育5 min，只有部分鞭毛舒展游动，染色效果欠佳；孵育18 min菌体鞭毛染色明显很大，与真实细菌差异较大；超过25 min后鞭毛从菌体上自然脱落 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。