尿蛋白检测技术与糖尿病肾病的早期诊断
摘要：糖尿病肾病是糖尿病微血管并发症和糖尿病常见的死因之一，早期发现和治疗对于改善糖尿病患者预后，延长生存期具有重要意义。本文介绍了尿蛋白检测技术在糖尿病肾病早期诊断中的作用及最新进展，非浓缩尿蛋白电泳是诊断糖尿病早期肾损害的敏感方法，运用尿蛋白组学技术筛选早期诊断标志物为该病的研究开辟了新的方向。
关键词：糖尿病肾病；尿蛋白检测；尿蛋白组学；非浓缩尿蛋白电泳糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病的一个严重并发症。据世界卫生组织报告，大约10%~20%的糖尿病患者死于肾衰竭。对于糖尿病肾病的诊断，虽然肾活检病理检查具有极高的诊断价值，但存在一定的危险性，而尿蛋白电泳可在无损伤的情况下及时判断肾脏损伤的部位与程度，因此，尿蛋白电泳在糖尿病肾病中的应用价值已被多数学者认同，为肾脏疾病的鉴别诊断、疗效监控，预后判断提供可靠依据。
尿蛋白谱的确定以往多采用经典的蛋白电泳技术，如醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、免疫电泳等，随着染色方法和检测分析技术的不断改进，电泳分析技术在尿蛋白谱确定方面也有了长足进步。这也为我们探索新的非侵入性的、更早期的糖尿病肾病检测方法提供了技术支持，从而更好地识别和治疗糖尿病肾病高风险个体，有效改善糖尿病患者的预后。
DN早期表现为肾小球高滤过状态，继之出现微量白蛋白，尿中白蛋白含量逐渐增高进入临床白蛋白尿期，最后发展为终末期-肾功能不全失代偿 期[1]。因此正确判断蛋白尿性质来源，了解肾脏的损伤类型及程度对临床具有重要意义。肾脏是糖尿病微血管病变最常受累的器官之一，可累及肾血管、肾小球、肾小管和间质[2]，在糖尿病肾病早期起病隐匿，进展缓慢，易被忽视。判断尿蛋白质性质和来源，对有效的治疗、阻止、延缓糖尿病肾病的病程有非常重要的临床价值。
从电泳结果看，肾小球型蛋白尿的比例居多，占52.5%；其次为混合型蛋白尿，占27.5%；而肾小管型蛋白尿和生理型蛋自尿所占比例较小，分别占14.5%、5.5%。以上结果提示DN以肾小球损伤为主，对肾小管的损伤较轻[3]。检测中还发现尿蛋白含量与肾脏受损程度并不呈正比，有些患者尿蛋白定性++时，尿蛋白电泳显示肾脏损伤并不局限于肾小球，同时累及肾小管，呈现混合型蛋白尿；而有些患者尿蛋白定性+++，但病变仅局限于肾小球，排出的蛋白皆为大、中分子量蛋白，呈部分选择性肾小球型蛋白尿。因DN发病隐匿，进展缓慢，逐渐引起全身的小动脉硬化病变，肾脏为最常受累的靶器官之一，可累及肾小球和肾小管，在没有干预的情况下，微量清蛋白尿患者在7年内有50%进入尿毒症期。这给糖尿病早期肾损害的患者提供了临床诊断依据，得到早期治疗。
综上所述，糖尿病有1/3发展为肾病，成为糖尿病患者寿命和生活质量的主要威胁。而早期诊断和早期介入可大大推迟肾合并症的发生。因此，可将SDS-AGE非浓缩尿蛋白电泳作为诊断糖尿病早期肾损害的敏感方法，其简便，无创性，比其它项目检测更直观地了解尿蛋白的组分及肾脏受损的部位和程度，对糖尿病肾病的早期诊断、鉴别诊断、指导治疗具有较大价值。
1早期诊断研究进展
DN起病隐袭，目前临床上早期诊断DN存在较大困难。肾穿刺活检术创伤大，并发症多，而且费用较高，患者难以接受，不能作为2型糖尿病患者检查的常规项目，而尿液富含肾脏病变信息，取材简单、无创伤，可重复取样，所以在DN早期诊断方面，对尿液的分析一直备受关注。目前临床上普遍采用尿微量白蛋白(Microalbuminuria，MALB)作为DN早期诊断指标，但已有许多研究发现MALB诊断DN的准确性和特异性不高，它受多种因素的影响，比如泌尿系统的炎症、出血，都会有血浆白蛋白的渗出或漏出，使尿白蛋白排出量增加，且在MALB出现时，DN已发展到第Ⅲ期，因而只依靠监测MALB并不能及时准确地对DN做出诊断，会带来较高的误诊和漏诊。随着蛋白质组学技术的发展，将其与体液技术相结合的尿液蛋白质组学技术为DN早期诊断标志物的筛选提供了技术支持，利用尿液蛋白质组学技术可能发现一些新的DN早期诊断标志物。
在1型糖尿病中DN有很高的发病率和病死率，临床上需要一种能够在肾脏功能和结构发生病损之前准确评价DN存在风险的方法，Meier等引利用尿蛋白组学技术来鉴别尿中的多肽和蛋白，在这项研究中，对44例1型糖尿病患者进行了5年的随访研究，以同年龄组正常人群为对照，留取随机尿作为标本，在不同的时期发现了相对分子质量介于800～66500的千余种不同的多肽，进一步精确分析显示：54种多肽仅在l型糖尿病患者中出现，另有88种多肽在DN早期患者中出现。
2讨论
糖尿病肾病肾功能的改变建立在肾小球和肾小管病理生理改变的基础之上.最早以肾小球滤过率(GFR)增高和肾体积增大为特征，随着病情进展，肾小球出现结构改变。肾小球毛细血管基底膜(GBM)增厚和系膜基质增加.有微量白蛋白漏出。此时已开始出现肾小球荒废。进入临床期。大量白蛋白尿产生，UAER>恤g/min或持续尿蛋白>0.59/d，为非选择性蛋白尿。随着大量尿蛋白丢失可出现低蛋白血症和水肿.约30%的患者可见典型的糖尿病肾病"三联征"即大量尿蛋白(>3.0 g/24 h)、水肿和高血压。
SDS-AGE非浓缩尿蛋白电泳作为诊断糖尿病肾损害的敏感方法.已逐步应用于临床工作，有报道认为SDS-AGE与肾活检结果相符，肾活检虽然对肾脏疾病的病理及免疫分型具有较高的诊断性.但肾穿刺属于创伤性诊断技术.可能造成出血、感染等并发症状.而且穿刺技术及取材部位也会影响穿刺的成败.而SDS-AGE具备简便、无创的特点.比其他项目检测更能直观地了解尿蛋白的组分及肾脏受损的部位和程度.故对肾损害的早期定位、鉴别诊断、指导治疗和预后判断具有积极、实用的临床价值。
另一方面，随着临床蛋白组学的发展，运用蛋白组学技术筛选DN的早期诊断标志物为早期治疗DN，延缓其发展带来了新的希望。这方面的许多研究都提示DN患者尿液中存在某些特殊的蛋白质标记物，但目前尚缺乏进一步的大样本研究资料及分子生物学证据，期待更多蛋白组学的研究为这些生物标记物的临床应用提供支持。
参考文献：
[1]Zhenguang Chen,Jinbin Liu,et al.Use of Sodium Lauroyl Sarcosinate in a High-Sensitivity Protein Assay by Resonance Light Scattering Technique[J].Journal of Biomolecular Screening,2006,11:400-406.
[2]Michael S.Kostapanos,Haralampos J,Milionis,et al. Rosovaststin Increases α-1 Microgiobulin Urinary Excretion in Patients With Primary Dyslipidemia[J].The Journal of Clinical Pharmacology,2006,46:1337-1343.
[3]张友华,张敏.蛋白尿的实验室检查[J].福建医药杂志,2006,(1):107-109.
编辑/肖慧, 百拇医药(祁昌)
关键词：糖尿病肾病；尿蛋白检测；尿蛋白组学；非浓缩尿蛋白电泳糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病的一个严重并发症。据世界卫生组织报告，大约10%~20%的糖尿病患者死于肾衰竭。对于糖尿病肾病的诊断，虽然肾活检病理检查具有极高的诊断价值，但存在一定的危险性，而尿蛋白电泳可在无损伤的情况下及时判断肾脏损伤的部位与程度，因此，尿蛋白电泳在糖尿病肾病中的应用价值已被多数学者认同，为肾脏疾病的鉴别诊断、疗效监控，预后判断提供可靠依据。
尿蛋白谱的确定以往多采用经典的蛋白电泳技术，如醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、免疫电泳等，随着染色方法和检测分析技术的不断改进，电泳分析技术在尿蛋白谱确定方面也有了长足进步。这也为我们探索新的非侵入性的、更早期的糖尿病肾病检测方法提供了技术支持，从而更好地识别和治疗糖尿病肾病高风险个体，有效改善糖尿病患者的预后。
DN早期表现为肾小球高滤过状态，继之出现微量白蛋白，尿中白蛋白含量逐渐增高进入临床白蛋白尿期，最后发展为终末期-肾功能不全失代偿 期[1]。因此正确判断蛋白尿性质来源，了解肾脏的损伤类型及程度对临床具有重要意义。肾脏是糖尿病微血管病变最常受累的器官之一，可累及肾血管、肾小球、肾小管和间质[2]，在糖尿病肾病早期起病隐匿，进展缓慢，易被忽视。判断尿蛋白质性质和来源，对有效的治疗、阻止、延缓糖尿病肾病的病程有非常重要的临床价值。
从电泳结果看，肾小球型蛋白尿的比例居多，占52.5%；其次为混合型蛋白尿，占27.5%；而肾小管型蛋白尿和生理型蛋自尿所占比例较小，分别占14.5%、5.5%。以上结果提示DN以肾小球损伤为主，对肾小管的损伤较轻[3]。检测中还发现尿蛋白含量与肾脏受损程度并不呈正比，有些患者尿蛋白定性++时，尿蛋白电泳显示肾脏损伤并不局限于肾小球，同时累及肾小管，呈现混合型蛋白尿；而有些患者尿蛋白定性+++，但病变仅局限于肾小球，排出的蛋白皆为大、中分子量蛋白，呈部分选择性肾小球型蛋白尿。因DN发病隐匿，进展缓慢，逐渐引起全身的小动脉硬化病变，肾脏为最常受累的靶器官之一，可累及肾小球和肾小管，在没有干预的情况下，微量清蛋白尿患者在7年内有50%进入尿毒症期。这给糖尿病早期肾损害的患者提供了临床诊断依据，得到早期治疗。
综上所述，糖尿病有1/3发展为肾病，成为糖尿病患者寿命和生活质量的主要威胁。而早期诊断和早期介入可大大推迟肾合并症的发生。因此，可将SDS-AGE非浓缩尿蛋白电泳作为诊断糖尿病早期肾损害的敏感方法，其简便，无创性，比其它项目检测更直观地了解尿蛋白的组分及肾脏受损的部位和程度，对糖尿病肾病的早期诊断、鉴别诊断、指导治疗具有较大价值。
1早期诊断研究进展
DN起病隐袭，目前临床上早期诊断DN存在较大困难。肾穿刺活检术创伤大，并发症多，而且费用较高，患者难以接受，不能作为2型糖尿病患者检查的常规项目，而尿液富含肾脏病变信息，取材简单、无创伤，可重复取样，所以在DN早期诊断方面，对尿液的分析一直备受关注。目前临床上普遍采用尿微量白蛋白(Microalbuminuria，MALB)作为DN早期诊断指标，但已有许多研究发现MALB诊断DN的准确性和特异性不高，它受多种因素的影响，比如泌尿系统的炎症、出血，都会有血浆白蛋白的渗出或漏出，使尿白蛋白排出量增加，且在MALB出现时，DN已发展到第Ⅲ期，因而只依靠监测MALB并不能及时准确地对DN做出诊断，会带来较高的误诊和漏诊。随着蛋白质组学技术的发展，将其与体液技术相结合的尿液蛋白质组学技术为DN早期诊断标志物的筛选提供了技术支持，利用尿液蛋白质组学技术可能发现一些新的DN早期诊断标志物。
在1型糖尿病中DN有很高的发病率和病死率，临床上需要一种能够在肾脏功能和结构发生病损之前准确评价DN存在风险的方法，Meier等引利用尿蛋白组学技术来鉴别尿中的多肽和蛋白，在这项研究中，对44例1型糖尿病患者进行了5年的随访研究，以同年龄组正常人群为对照，留取随机尿作为标本，在不同的时期发现了相对分子质量介于800～66500的千余种不同的多肽，进一步精确分析显示：54种多肽仅在l型糖尿病患者中出现，另有88种多肽在DN早期患者中出现。
2讨论
糖尿病肾病肾功能的改变建立在肾小球和肾小管病理生理改变的基础之上.最早以肾小球滤过率(GFR)增高和肾体积增大为特征，随着病情进展，肾小球出现结构改变。肾小球毛细血管基底膜(GBM)增厚和系膜基质增加.有微量白蛋白漏出。此时已开始出现肾小球荒废。进入临床期。大量白蛋白尿产生，UAER>恤g/min或持续尿蛋白>0.59/d，为非选择性蛋白尿。随着大量尿蛋白丢失可出现低蛋白血症和水肿.约30%的患者可见典型的糖尿病肾病"三联征"即大量尿蛋白(>3.0 g/24 h)、水肿和高血压。
SDS-AGE非浓缩尿蛋白电泳作为诊断糖尿病肾损害的敏感方法.已逐步应用于临床工作，有报道认为SDS-AGE与肾活检结果相符，肾活检虽然对肾脏疾病的病理及免疫分型具有较高的诊断性.但肾穿刺属于创伤性诊断技术.可能造成出血、感染等并发症状.而且穿刺技术及取材部位也会影响穿刺的成败.而SDS-AGE具备简便、无创的特点.比其他项目检测更能直观地了解尿蛋白的组分及肾脏受损的部位和程度.故对肾损害的早期定位、鉴别诊断、指导治疗和预后判断具有积极、实用的临床价值。
另一方面，随着临床蛋白组学的发展，运用蛋白组学技术筛选DN的早期诊断标志物为早期治疗DN，延缓其发展带来了新的希望。这方面的许多研究都提示DN患者尿液中存在某些特殊的蛋白质标记物，但目前尚缺乏进一步的大样本研究资料及分子生物学证据，期待更多蛋白组学的研究为这些生物标记物的临床应用提供支持。
参考文献：
[1]Zhenguang Chen,Jinbin Liu,et al.Use of Sodium Lauroyl Sarcosinate in a High-Sensitivity Protein Assay by Resonance Light Scattering Technique[J].Journal of Biomolecular Screening,2006,11:400-406.
[2]Michael S.Kostapanos,Haralampos J,Milionis,et al. Rosovaststin Increases α-1 Microgiobulin Urinary Excretion in Patients With Primary Dyslipidemia[J].The Journal of Clinical Pharmacology,2006,46:1337-1343.
[3]张友华,张敏.蛋白尿的实验室检查[J].福建医药杂志,2006,(1):107-109.
编辑/肖慧, 百拇医药(祁昌)
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