klotho基因单核苷酸多态性与老年2型糖尿病的相关性研究(2)
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参见附件。
1.2方法
1.2.1 DNA提取取外周静脉血2ml,EDTA抗凝，使用上海华舜生物工程有限公司提供的人类血液基因组DNA抽提试剂盒抽提外周血白细胞基因组DNA，操作方法按试剂盒说明进行。
1.2.2 KL G-395A、F352V与C370S基因多态性检测方法
1.2.2.1 KL G-395A、F352V与C370S基因多态性检测引物Klotho的基因序列及相应位点的SNP信息均参照NCBI,利用Primer5.0软件设计等位基因特异性引物，设计方法参见文献[4-6]，具体设计引物序列见表1。所有引物合成操作均由中国大连宝生物技术有限公司(TaKaRa)完成。
1.2.2.2 KL G-395A、F352V与C370S基因多态性检测方法Klotho G-395A SNP检测：PCR反应体系及反应条件，参照文献[4-6]进行。取PCR产物5ul，使用琼脂糖凝胶-溴化乙锭染色法电泳，凝胶成像系统观察结果并判断其结果。klotho基因G-395A多态性等位基因型为GG、GA、AA3种形式；其PCR扩增产物片段长度为147bps。
Klotho F352V SNP检测：PCR反应体系及反应条件，参照文献[4-6]进行。取PCR产物5ul，使用琼脂糖凝胶-溴化乙锭染色法电泳，凝胶成像系统观察结果并判断其结果。klotho基因F-352V多态性等位基因型为FF、FV、VV3种；其PCR扩增产物片段长度为230bps。
Klotho C-370S SNP检测： PCR反应体系及反应条件，参照文献[4-6]进行。取PCR产物5ul，使用琼脂糖凝胶-溴化乙锭染色法电泳，凝胶成像系统观察结果并判断其结果。klotho基因C370S多态性等位基因型为CC、CS、SS3种；其PCR扩增产物片段长度为285bps。
1.2.3生化指标检测 实验组和对照组均同时检测血清生化指标，包括总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C) ......
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