E3泛素连接酶HECTD3真核表达质粒的鉴定
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摘要：目的 鉴定E3泛素连接酶 (homologous to the E6-associated protein carboxyl terminus domain containing 3，HECTD3) 基因的真核表达质粒。方法 提取无内毒素真核表达质粒pcDNA-HECTD3，利用lipofectamine 2000将其转染进卵巢癌细胞SKOV-3细胞，qRT-PCR法和蛋白质免疫印迹技术检测该基因的表达情况。结果 真核表达质粒pcDNA-HECTD3可以显著地提高HECTD3基因在mRNA和蛋白水平的表达量。结论 HECTD3基因的真核表达质粒构建成功，可以用于后续卵巢癌发生发展的分子生物学研究。
关键词：E3泛素连接酶；卵巢癌；真核表达质粒
卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤，仅2011年1年就导致全世界140000人死亡[1]。HECTD3 (homologous to the E6-associated protein carboxyl terminus domain containing 3)是一个功能目前尚未阐述清楚的新的E3泛素连接酶[2]。有报道指出该基因可能在乳腺癌和宫颈癌中介导顺铂的化疗耐受[3]，但尚未有人报道HECTD3在卵巢癌中的作用。实验室前期构建该基因真核表达质粒pcDNA-HECTD3，本研究将鉴定该真核表达质粒在胞内对HECTD3基因表达情况的影响，为进一步研究HECTD3基因在卵巢癌发生发展中的作用提供有力的工具和手段。
1实验材料
卵巢癌细胞SKOV-3和真核表达质粒pcDNA-HECTD3由本室保存。Trizol、Lipofectamine 2000购自美国invitrogen公司，RPMI-1640、胎牛血清、胰酶购自美国Gibco公司 ......
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