荧光定量PCR技术在肺炎链球菌检测中的应用(1)
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摘要：目的 通过荧光定量PCR技术对痰中肺炎链球菌(SP)的检测，明确其较传统检测方法的优越性。方法 收集2013年1月～2014年1月入住我院呼吸科的123例AECOPD患者，对合格痰标本(108例)进行培养，观察培养结果；通过荧光RT-PCR技术检测痰标本中的SP，并粗略估算SP的感染率。结果 合格痰标本108份，SP培养阳性率6.5%；而应用荧光PCR定量检测，阳性率为58.3%，粗略估计AECOPD中SP的感染情况，约为17.6%。结论 荧光定量PCR对细菌的检测明显优于传统培养方法。
关键词：肺炎链球菌；COPD急性加重期；荧光定量PCR；痰细菌培养
1 资料与方法
1.1一般资料 收集我院123例临床确诊的AECOPD患者，入院时间为2013年1月～2014年1月，其中男性78例，女性45例，年龄46～87岁，既往有吸烟史者54人。全部病例符合中华医学会呼吸病学会慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2007年及2013年修订版)的诊断标准[1，2]，患者主要表现有气促加重，常伴有喘息、胸闷、咳嗽加剧、痰量增加、痰液颜色和(或)黏度改变、发热及全身症状等，入院患者均具有CT，排除其他病变如肺癌、单纯肺炎、肺结核、肺间质病等，10例患者合并支气管扩张，入院前应用抗生素者22例。为减少抽样误差并排除季节及环境因素的影响，研究时间>1年。
1.2 实验仪器与试剂 基因扩增仪(型号为Roche Light Cycler480)，全自动细菌鉴定药敏分析仪(美国碧迪)。引物、探针、标准品(大连宝生物工程有限公司合成)；肺炎链球菌标准菌株，型号为BZW23112； 柱式小量细菌基因组 DNA 抽提试剂盒[3] (W6511)(上海华舜生物技术有限公司) ......
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