新型重组人血管内皮抑素联合榄香烯对H22腹水瘤细胞的作用
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摘要：目的 探讨新型重组人血管内皮抑素(恩度)联合榄香烯注射液对小鼠腹水瘤细胞株H22的作用。方法 ①CCK-8检测恩度、榄香烯及两者联合对H22细胞增殖的作用。②ELISA检测药物对H22细胞上清液中VEGF和MMP-2含量的影响。③Western-Blot检测药物对H22细胞中VEGF、MMP-2蛋白表达的影响。结果 ①恩度对H22细胞的抑制率在4～8%，有剂量依赖性无时间依赖性；榄香烯对H22细胞的抑制率在10～40%，具有时间、剂量依赖性；恩度不能增强榄香烯对H22细胞增殖的抑制作用。②恩度和榄香烯均能抑制H22细胞上清液中VEGF和MMP-2的含量，联合后增强该作用。③恩度和榄香烯可抑制H22细胞中VEGF和MMP-2蛋白表达，两者联合能增强该作用。结论 恩度联合榄香烯不能协同抑制H22细胞的增殖，可协同抑制VEGF和MMP-2蛋白的表达。
关键词：重组人血管内皮抑素；榄香烯；腹水瘤细胞；体外实验
既往动物实验发现[1]，新型重组人血管内皮抑素(恩度)联合榄香烯注射液可协同抑制荷H22腹水瘤小鼠腹水形成，本实验继续探讨了恩度和榄香烯体外对H22腹水瘤细胞的作用。
1资料与方法
1.1细胞株和试剂 小鼠肝癌H22细胞株由中国科学院上海细胞所提供，在含10%新生小牛血清的RPMI1640培养基及37℃、5%CO2孵箱中培养。重组人血管内皮抑素(恩度)原液(10g/L，批号：YY2011008)由先声药物有限公司提供。榄香烯注射液(5g/L，批号：0909211)由大连金港药业提供。RPMI 1640培养基和胎牛血清购自Gibco公司。CCK-8检测试剂盒：KGA317，购自凯基生物。血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、β-actin抗体购自Abcam公司。小鼠VEGF和MMP-2检测试剂盒购自R&D公司。
1.2方法
1.2.1对数生长期的H22细胞按1×105/mL接种于96孔板内，培养箱中孵育24h。设组如下：阴性对照组(RPMI1640培养基)、榄香烯单药组(200ug/ml、100ug/ml和50ug/ml)、恩度单药组(100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml)及恩度和榄香烯三个浓度两两联合 ......
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