地黄寡糖在2型糖尿病动物模型的降血糖作用及初步机制(2)
1.4.6 肝糖原含量测定(蒽酮法)[5] 取上述10%肝提取液1ml,置10ml刻度试管中,加入10 N KOH 1ml,置沸水浴煮沸1h。取出冷却后,加入0.5 ml冰醋酸中和过量的碱,加水至10 ml。用10 ml容量瓶配制不同浓度的葡萄糖标准液(倍比稀释)。各取上述溶液1ml置试管中,移入冰水浴内,各加入蒽酮试剂2 ml,摇匀,待冷至室温后,移至沸水浴中。6min后取出放入冰水浴中冷却。在分光光度计650 nm波长处纪录吸收度(表1)。据此数值绘出葡萄糖标准曲线图(图1)。表1 不同浓度葡萄糖标准液的吸收度值
图1 葡萄糖标准曲线的建立
由上可得标准曲线方程:y = 0.0085x - 0.0002 R= 0.9998
1.4.7 肝脏葡萄糖-6-磷酸酶活性测定 据文献方法[6-7]略加修改。肝组织以5倍体积0.25 M 蔗糖制成匀浆,粗匀浆于高速离心机上11000 g离心30 min,弃去沉淀,上清液用于酶活性测定 ......
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