胆碱酯酶定量检测在有机磷中毒中的应用
摘要：目的 探讨胆碱酯酶定量检测在有机磷中毒中的应用价值。方法 设计实验，在接收有机磷中毒患者后，采样定量计算胆碱酯酶，并重复试验5次计算误差，选择健康人重复试验10次，计算检测误差。结果 定量检测结果显示，患者在50～100U/L水平中分布比重最高，其次为100～150U/L；胆碱酯酶严重程度症状评价：轻度12例、中度37例、重度33例，轻度分布在50～220U/L，中度分布在50～150U/L，重度分布在0～150U/L，Kappa一致性系数为0.92；重复定量检测kappa一致性系数为0.83，精密度实验，正误差<4%，中度患者误差<3%。结论 定量检测操作简单、快速、可靠、数据稳定，以"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L轻"为标准，评估中毒水平，可基本满足临床需要。
关键词：定量检测；农药中毒；有机磷农药中毒(AOPP)；胆碱酯酶；中毒水平
我国是农业大国，农药生产量、使用量巨大，农业工作者、农药产销者接触农药频繁，成为农药中毒高风险人群，同时因生存压力加大，服药自尽者例数也显著上升，每年农药中毒者超10万人，其中约1/5患者死亡。急性有机磷农药中毒(AOPP)是我国最常见的急性中毒疾病之一，约占农药中毒80%[1]。AOPP患者轻则伴有生理功能紊乱，重者可出现休克、呼吸衰竭甚至死亡，重症AOPP死亡率、并发症发生率极高，常用的治疗方法包括血流灌洗、药物解毒、洗胃等，其中部分疗法存在一定使用风险，使用应据患者病情而定，及时、快速、准确的判断患者病情，采取正确的抢救措施是改善患者预后的关键。胆碱酯酶活力检测是评估AOPP中度程度的重要依据、常用手段，但检测困难、成本高、临床难普及，考虑到AOPP患者多来自于广大的农村基层，医疗条件有限，而胆碱酯酶定量检测相对容易、成本低，适合临床推广[2]。本次研究就胆碱酯酶定量检测在有机磷中毒中的应用价值进行探讨，并初步拟定定量检测评估AOPP中毒水平标准。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1一般资料 本组患者82例，收治于2009年2月～2014年8月，其中男32例，女50例，年龄14～79岁，平均(34±6)岁。中毒途径：喷洒毒药中毒12例，误服或自服70例，服用剂量5ml～145ml，平均(82±31)ml；服用至就诊时间：50min～80min，平均(51±14)min。中毒药物种类：①剧毒类4例，甲拌磷2例、内吸磷1例、对硫磷1例；②高度类44例，敌敌畏24例、氧化乐果20例；③中等毒类27例，乐果26例、敌百虫1例；⑤低毒类7例，均为马拉硫磷。纳入标准：①非他院转入，本院收治；②未合并有其它类型农药中毒，后期确诊为AOPP；③临床资料均完整[2]。
1.2方法
1.2.1 实验一 日立7180自动生化分析仪及其配套试剂。其基本原理是拟胆碱脂酶催化丙酰硫代胆碱水解，产生丙酸与硫代胆碱，后者与无色二硫代双反应，形成黃色的5巯基-2-硝基苯甲酸。选择1体积底物与100ml配套试剂混合，摇匀，备用。采用速率法，波长405nm，取2μl样品稀释至38μl，试剂体积200μl，稀释量10μl，温度控制在30℃，延滞35s、间隔15s，测定点数8，测定公式：胆碱酯酶(IU/L)=△A/min×12632，△A/min为1min内吸光度变化值。
, 百拇医药
1.2.2实验二 重复实验5次，计算检测误差，评价每次检测评价中毒水平一致性。选择健康人，重复试验10次，计算检测误差。
1.3判定标准 胆碱酯酶严重程度症状评价：①轻度，头晕、头痛、恶心、呕吐、多汗、胸闷、视力模糊、无力、瞳孔缩小等症状表现；②中度：除上述症状外，还有肌纤维颤动、瞳孔明显缩小、轻度呼吸困难、流涎、腹痛、步态蹒跚等症状表现，但意识尚清楚；③重度：除中度症状外，还可伴有昏迷、肺水肿、呼吸麻痹与严重受限、脑水肿等严重并发症。
1.4统计学处理 以SPSS18.0软件包处理所获数据资料，以(x±s)表示计量资料，以[n(%)]表示计数资料，P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2.1实验一
2.1.1定量检测值域分布 定量检测结果显示如下表1，患者在50～100U/L水平中分布比重最高，其次为100～150U/L。
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2.1.2中毒水平 参照胆碱酯酶严重程度症状评价中毒水平，轻度12例、中度37例、重度33例。以"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L轻"为标准，评估中毒水平，Kappa一致性系数为0.92，属高度一致，见表2。
2.2实验二 重复检测kappa一致性系数为0.83，属高度一致，误差较小，见表3。
精密度实验，正误差<4%，中度患者误差<3%，见表4。
3 讨论
以胆碱酯酶活力水平评价AOPP中毒标准已较明确，即轻度中毒CHe活力50%～70%，中度中毒CHe活力30%～50%，重度中毒CHe<30%，采用公式"胆碱酯酶活性=被测血样中的胆碱酯酶活性绝对值/正常人中胆碱酯酶活性绝对值[3]"，胆碱酯酶活力检测正常值5000～13200U/L，中国常模健康人平均值为9100U/L(100%)，轻度中毒CHe活力50%～70%，中度中毒CHe活力30%～50%，重度中毒CHe<30%，据公式推算平均值：轻度中毒4500U/L～6370U/L，中度中毒2730U/L～4500U/L，重度中毒<2730U/L[4]。但考虑到个体差异，这种推算误差较大，而检测不易受中毒影响的羟基胆碱酯酶，按照比重换算正常状态下全血胆碱酯酶再计算胆碱酯酶活性，则需要耗费大量的时间，难以应用于临床，且所需仪器、试剂较多。本次研究结果显示定量检测以"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L轻度"为标准，评估结果与胆碱酯酶严重程度症状评价结果一致性系数K=0.92，反映定量检测评估中毒水平效果较好。后经实验二，证实定量评估结果较稳定，可满足临床需要。
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综上所述，定量检测操作简单、快速，以"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L轻"为标准，评估中毒水平，可基本满足临床需要。
参考文献：
[1]王文余，任从棉，张晓军.血清胆碱酯酶与电解质的持续检测在重度有机磷中毒诊治中的临床意义[J].当代医学，2009，24(179)：72-73.
[2]白一伟.胆碱酯酶活力快速测定盒在有机磷中毒治疗中的指导价值[J].中国社区医师，2011，13(18)：202-203.
[3]张永年，李国玉，焦贤芳.有机磷农药作业工人血清胆碱酯酶活力分析[J].职业与健康，2006，22(22)：1938-1939.
[4]王元明.胆碱酯酶活力测定在有机磷中毒中的作用评价[J].亚太传统医药，2009，5(2)：114-115.编辑/哈涛, 百拇医药(李庆德 田时谦 匡奇娟)
关键词：定量检测；农药中毒；有机磷农药中毒(AOPP)；胆碱酯酶；中毒水平
我国是农业大国，农药生产量、使用量巨大，农业工作者、农药产销者接触农药频繁，成为农药中毒高风险人群，同时因生存压力加大，服药自尽者例数也显著上升，每年农药中毒者超10万人，其中约1/5患者死亡。急性有机磷农药中毒(AOPP)是我国最常见的急性中毒疾病之一，约占农药中毒80%[1]。AOPP患者轻则伴有生理功能紊乱，重者可出现休克、呼吸衰竭甚至死亡，重症AOPP死亡率、并发症发生率极高，常用的治疗方法包括血流灌洗、药物解毒、洗胃等，其中部分疗法存在一定使用风险，使用应据患者病情而定，及时、快速、准确的判断患者病情，采取正确的抢救措施是改善患者预后的关键。胆碱酯酶活力检测是评估AOPP中度程度的重要依据、常用手段，但检测困难、成本高、临床难普及，考虑到AOPP患者多来自于广大的农村基层，医疗条件有限，而胆碱酯酶定量检测相对容易、成本低，适合临床推广[2]。本次研究就胆碱酯酶定量检测在有机磷中毒中的应用价值进行探讨，并初步拟定定量检测评估AOPP中毒水平标准。
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1 资料与方法
1.1一般资料 本组患者82例，收治于2009年2月～2014年8月，其中男32例，女50例，年龄14～79岁，平均(34±6)岁。中毒途径：喷洒毒药中毒12例，误服或自服70例，服用剂量5ml～145ml，平均(82±31)ml；服用至就诊时间：50min～80min，平均(51±14)min。中毒药物种类：①剧毒类4例，甲拌磷2例、内吸磷1例、对硫磷1例；②高度类44例，敌敌畏24例、氧化乐果20例；③中等毒类27例，乐果26例、敌百虫1例；⑤低毒类7例，均为马拉硫磷。纳入标准：①非他院转入，本院收治；②未合并有其它类型农药中毒，后期确诊为AOPP；③临床资料均完整[2]。
1.2方法
1.2.1 实验一 日立7180自动生化分析仪及其配套试剂。其基本原理是拟胆碱脂酶催化丙酰硫代胆碱水解，产生丙酸与硫代胆碱，后者与无色二硫代双反应，形成黃色的5巯基-2-硝基苯甲酸。选择1体积底物与100ml配套试剂混合，摇匀，备用。采用速率法，波长405nm，取2μl样品稀释至38μl，试剂体积200μl，稀释量10μl，温度控制在30℃，延滞35s、间隔15s，测定点数8，测定公式：胆碱酯酶(IU/L)=△A/min×12632，△A/min为1min内吸光度变化值。
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1.2.2实验二 重复实验5次，计算检测误差，评价每次检测评价中毒水平一致性。选择健康人，重复试验10次，计算检测误差。
1.3判定标准 胆碱酯酶严重程度症状评价：①轻度，头晕、头痛、恶心、呕吐、多汗、胸闷、视力模糊、无力、瞳孔缩小等症状表现；②中度：除上述症状外，还有肌纤维颤动、瞳孔明显缩小、轻度呼吸困难、流涎、腹痛、步态蹒跚等症状表现，但意识尚清楚；③重度：除中度症状外，还可伴有昏迷、肺水肿、呼吸麻痹与严重受限、脑水肿等严重并发症。
1.4统计学处理 以SPSS18.0软件包处理所获数据资料，以(x±s)表示计量资料，以[n(%)]表示计数资料，P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2.1实验一
2.1.1定量检测值域分布 定量检测结果显示如下表1，患者在50～100U/L水平中分布比重最高，其次为100～150U/L。
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2.1.2中毒水平 参照胆碱酯酶严重程度症状评价中毒水平，轻度12例、中度37例、重度33例。以"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L轻"为标准，评估中毒水平，Kappa一致性系数为0.92，属高度一致，见表2。
2.2实验二 重复检测kappa一致性系数为0.83，属高度一致，误差较小，见表3。
精密度实验，正误差<4%，中度患者误差<3%，见表4。
3 讨论
以胆碱酯酶活力水平评价AOPP中毒标准已较明确，即轻度中毒CHe活力50%～70%，中度中毒CHe活力30%～50%，重度中毒CHe<30%，采用公式"胆碱酯酶活性=被测血样中的胆碱酯酶活性绝对值/正常人中胆碱酯酶活性绝对值[3]"，胆碱酯酶活力检测正常值5000～13200U/L，中国常模健康人平均值为9100U/L(100%)，轻度中毒CHe活力50%～70%，中度中毒CHe活力30%～50%，重度中毒CHe<30%，据公式推算平均值：轻度中毒4500U/L～6370U/L，中度中毒2730U/L～4500U/L，重度中毒<2730U/L[4]。但考虑到个体差异，这种推算误差较大，而检测不易受中毒影响的羟基胆碱酯酶，按照比重换算正常状态下全血胆碱酯酶再计算胆碱酯酶活性，则需要耗费大量的时间，难以应用于临床，且所需仪器、试剂较多。本次研究结果显示定量检测以"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L轻度"为标准，评估结果与胆碱酯酶严重程度症状评价结果一致性系数K=0.92，反映定量检测评估中毒水平效果较好。后经实验二，证实定量评估结果较稳定，可满足临床需要。
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综上所述，定量检测操作简单、快速，以"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L轻"为标准，评估中毒水平，可基本满足临床需要。
参考文献：
[1]王文余，任从棉，张晓军.血清胆碱酯酶与电解质的持续检测在重度有机磷中毒诊治中的临床意义[J].当代医学，2009，24(179)：72-73.
[2]白一伟.胆碱酯酶活力快速测定盒在有机磷中毒治疗中的指导价值[J].中国社区医师，2011，13(18)：202-203.
[3]张永年，李国玉，焦贤芳.有机磷农药作业工人血清胆碱酯酶活力分析[J].职业与健康，2006，22(22)：1938-1939.
[4]王元明.胆碱酯酶活力测定在有机磷中毒中的作用评价[J].亚太传统医药，2009，5(2)：114-115.编辑/哈涛, 百拇医药(李庆德 田时谦 匡奇娟)