中国人群运动性猝死相关基因快速检测方法研究(2)
1.2基因组DNA提取 50例猝死个体临床血液样本，采用Chelex基因组DNA 提取试剂盒， 参照使用说明书操作， 提取基因组DNA。取直径3～5mm血斑置于1.5ml离心管中，加入sdH2O1ml，振荡离心，弃上清，重复步骤2次，弃上清，将5%Chelex-100振荡悬浮后快速用剪掉头的枪头吸取200μl 加入离心管中，振荡数秒，于56℃水浴保温30min后，振荡数秒，95℃沸水浴10min，轻微振荡数秒。2000rpm离心5min，上清为提取的DNA，-20℃保存备用。1.3阳性模板制备 根据7个靶基因SNP位点设计突变引物，并进行PCR扩增，将引入突变位点的目的片段克隆到pMD18-TVector载体中(利用Takara MutanBest Kit对PCR产物进行末端平滑化及5′磷酸(P)化处理，高效连接试剂Ligation Solution I进行自身连接 ......
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