中国人群运动性猝死相关基因快速检测方法研究(3)
1.5.4 DNA测序验证AS-PCR扩增产物 为了进一步验证采用一系列AS-PCR扩增条件优化后的产物多态性的准确性,通过PCR产物琼脂糖凝胶回收试剂盒将扩增产物回收。由去离子甲酰胺与分子量内标组成上样混合物(0.2μl分子量内标×进样数+9.8μl去离子甲酰胺×进样数),将10μl上样混合物与1μl扩增产物或等位基因分析标准物混合,避免产生气泡,95℃变性5min,冰浴后电泳,用ABI3130遗传分析仪检测分析。2 结果
2.1阳性模板的制备 本研究根据7个基因SNP位点,应用定点突变技术在野生型的基础上得到相应的DNA阳性模板,各个基因的SNP多态性如表2所示。
表2 心源性猝死相关基因SNP多态基因型
基因名称
基因型 KCNE1 KCNH2 SCN5A KCNJ11 CACNA1C CACNB2BNUP155
野生型 AACC CC GG GG CC GG
突变型 A/G GGC/T C/T TT A/G A/G C/T A/G
2.2 AS-PCR 反应条件优化 运用AS-PCR方法同时检测这7个SNP多态位点 ......
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