新疆汉族人群ALDH2(Glu504Lys)基因多态性分析与原发性高血压的关系(2)
1.2 方法1.2.1 生化指标的测定:所有患者清晨空腹抽取无抗凝剂静脉血2ml送检。血标本严格按操作要求处理,均在2h内完成检测。血肌酐、尿酸、葡萄糖、血脂、脂蛋白a、血清胱抑素等指标采用美国Beckman Coulter DxC80全自动分析仪测定(试剂、标准品、质控品均由浙江夸克生物技术公司提供)。
1.2.2 ALDH2基因型检测 ①样本收集、DNA提取:遵守知情同意原则,抽取研究对象静脉血2ml,EDTA(乙二胺四乙酸二钠)抗凝管中,按照上海白鸥科技有限公司提供的血液基因组DNA提取试剂盒要求提取和纯化DNA。②PCR扩增条件为:将ALDH2扩增液分装到0.2ml无菌薄壁管中,每管22μl。每管再加1μl反应液A,2μl提取好的DNA溶液,昆匀后离心,将各管放人PCR仪中50℃5min;94℃5min;94℃25sec,60℃25sec,72℃30sec,35cycles。③杂交显色:取出Baio杂交显色试剂盒,将反应试管条拿出(其中预杂交液、洗液1、洗液2和洗液3已加在反应试管条的各自试管杯中,做好标记),将反应液B低速离心,吸取10μl加入杂交缓冲液中混匀 ......
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