摘要：目的 利用CRISPR/Cas9技术建立肠癌抑制基因Mindin的稳定敲除细胞株。方法 针对Mindin基因编码序列设计三个向导RNA(sgRNA)，将表达sgRNA和Cas9蛋白的质粒共同电转进小鼠成纤维细胞L929中，加入药物筛选获得细胞库。测序检测细胞库基因组的突变效率，并从高突变细胞库中挑取单克隆进一步培养与鉴定。结果 三个sgRNA都能介导CRSIPR/Cas9高效编辑Mindin基因靶位点，从中挑选得到Mindin基因缺失并可稳定遗传的L929细胞株。结论 我们得到了一个稳定敲除Mindin基因的L929细胞株，为后续研究Mindin基因在肠癌发生与发展过程中的作用提供了必要的研究素材，为其动物模型的建立打下坚实的基础。

    关键词：CRISPR/Cas9；基因敲除；Mindin

    中图分类号：Q7 文献标识码：A

    CRISPR/Cas9是近年来从古细菌免疫系统中发展起来的一种新型高效的基因组编辑技术，利用人工设计的sgRNA介导外源表达的Cas9核酸酶与基因组靶点特异性结合从而实现对靶序列的特异性切割 ......