1 透射电子显微镜进行形态学观察

    透射电子显微镜是从形态学上观察自噬现象最直接，最经典的方法，可以用于监测选择性和非选择性自噬，能够定性定量检测自噬过程中各种结构，包括吞噬泡、自噬体、自噬内涵体，自噬溶酶体等，细胞质的降解区域被吞噬泡隔离开，吞噬泡进而转化成自噬体，自噬体是自噬的形态学特征，具有双层膜结构，包含着形态完整的细胞器。虽然电镜是检测自噬应用最广泛的方法，但同时也是最容易出问题的，主要是方法的问题：①选择被检测的标本是电镜检测自噬成功的关键。固定体外组织相对直接一些，但是要注意固定标本时去掉没有意义没有价值的部分；②双层膜并不是自噬体的超微结构标志，线粒体也是含双层界膜的细胞器，破坏的线粒体形态学与自噬体相似，但线粒体内膜有折瘠，而自噬体内膜不会折瘠；③有些情况下需要对电镜图像进行断层重建，进一步确定自噬结构是球形的，以免和其他在薄层外观上相类似的结构混淆，比如含有沉淀物的线粒体；④分析一个细胞单个层面的时候容易被误导或者难以分析自噬结构，如果有足够的结构分辨率便能够解决上述问题，而聚焦离子束/扫描双束电子显微镜能够更加简易的进行三维分析。另外被证明能够有效分析自噬中复杂膜结构的技术方法还包括三维电子断层扫描、冷冻电子显微镜、关联光电显微镜等(CLEM)对于确认自噬体很有帮助 ......