复方鱼腥草滴丸质量标准研究
摘要：目的 建立复方鱼腥草滴丸的质量标准。方法 采用TLC法对处方中鱼腥草、黄芩进行定性鉴别，采用HPLC法测定黄芩中黄芩苷的含量。结果 在TLC中均能检出鱼腥草，黄芩，且斑点清晰，专属性强，阴性对照无干扰；黄芩苷在0.10255～2.04491μg内呈良好线性关系(r=0.9999)，平均回收率为98.94%(n=6)，RSD=1.3%。结论 所建立的方法准确、可靠、专属性强，可以用于该制剂的质量控制。
关键词：复方鱼腥草滴丸；TLC法；鱼腥草；黄芩；HPLC法；黄芩苷
复方鱼腥草滴丸由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘和金银花五味药材制备而成，具有清热解毒之功效。用于外感风热所致的急喉痹，急乳蛾，症见咽部红肿、咽痛；急性咽炎，急性扁桃体炎见上述症候者[1]。原标准TLC方法重现性、稳定性较差，含量测定方法前处理复杂，重现性差，为了更好地提高产品质量的可控性，本文对鱼腥草、黄芩进行了薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱法对方中黄芩的活性成分黄芩苷进行含量测定，为该制剂生产提供了质量控制依据。
1 仪器与试药
岛津LC-20AD高效液相色谱仪，Labsolution工作站，PDA检测器。
黄芩苷对照品(批号为110715-201117)，鱼腥草对照药材(批号为121046-200403)均购自中国食品药品检定研究院。复方鱼腥草滴丸及处方中5味药材由江西天施康中药股份有限公司提供。硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)，水为超纯水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1鱼腥草的薄层鉴别 取本品5g，加水20ml，加热回流30min，放冷，离心，取上清液，用氨水调节pH值11～12，用乙酸乙酯振摇提取2次，30ml/次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为样品溶液。另取鱼腥草对照药材0.5g，加水50ml，煎煮30min，滤过，浓缩滤液至约20ml，用氨水调节pH值11～12，同法制成对照药材溶液。取缺鱼腥草药材的阴性样品5g，按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，分别吸取样品溶液10μl、对照溶液5μl，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热约1min，置紫外光灯(365nm)下检视。结果样品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光主斑点。阴性对照液无干扰，见图1。
2.2黄芩的薄层鉴别 取本品2g，加温水20ml，超声提取10min，用稀盐酸调节pH值1.5～2.0，80℃保温1h，离心，弃去上清液，沉淀用水洗涤2次，残渣加2ml甲醇使溶解，作为样品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。取缺黄芩药材的阴性样品2g，按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，分别吸取样品溶液1μl、对照溶液5μl，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。结果样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照液无干扰，见图2。
2.3含量测定
2.3.1色谱条件 色谱柱为Ultimate XB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(45：55：0.2)；流速：1.0ml/min；检测波长：315nm，进样量：10μl。
2.3.2对照溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
2.3.3样品溶液的制备 取本品，研碎，取约0.2g，精密称定，置100ml量瓶中，加70%乙醇60ml，超声提取30min，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，作为样品溶液。
2.3.4阴性对照溶液的制备 取缺黄芩的模拟制剂约0.2g，按样品溶液的制备方法制备，即得。
2.3.5方法专属性考察 按上述色谱条件分别进样供试品溶液、黄芩苷对照品和缺黄芩阴性对照溶液，结果阴性对照无干扰(见图3)。
2.3.6标准曲线的制备 分别精密吸取对照品溶液(其浓度为0.204491mg/ml)1ml、5ml，置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液Ⅰ、Ⅱ；再分别精密吸取对照品溶液Ⅰ、Ⅱ各5μl、10μl、20μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品进样量为横坐标X，峰面积积分值为纵坐标Y，得回归方程：Y=3148105.2462x-26698.8788，R2=0.9999，表明黄芩苷在0.10255～2.04491μg内线性关系良好。
2.3.7精密度试验 精密吸取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，连续进样7次，结果黄芩苷峰面积RSD为0.1%。
2.3.8稳定性试验 精密吸取同一样品溶液分别于0、1、2、4、8、14、24h进样10μl，测定黄芩苷的峰面积，计算其RSD为0.2%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.3.9重复性试验 精密称取同一批号样品(批号12120901) 6份，按"2.3.3"项下方法制备样品溶液，进样，测定，结果黄芩苷平均含量(n=6)为29.9528mg/g，RSD为0.7%。
2.3.10加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(其批号12120901)约0.1g，置100ml量瓶中，精密添加对照品溶液(0.063236mg/ml)各50ml，按"2.3.3"项下方法制备样品溶液， 依法测定。结果黄芩苷平均回收率为98.94%，RSD=1.3%。
2.3.11样品测定 取3批样品，按"2.3.3"项下方法制备样品溶液，依法测定，结果批号为12120201、12120901、12121101的样品中黄芩苷含量分别为76.53mg/粒、76.18mg/粒、78.98mg/粒。
3 讨论
3.1薄层鉴别试验 鱼腥草为方中君药，现标准仅以甲基正壬酮为对照对产品中鱼腥草进行薄层鉴别，不能较全面的对其进行质量控制，故参照文献[2]，以鱼腥草对照药材进行薄层鉴别，结果该方法分离效果好，重现性较好，阴性对照无干扰，表明该方法专属性强，可作为本制剂定性检测的指标。同时参考文献[3，4]，以板蓝根、连翘对照药材，黄芩苷、绿原酸对照品为对照进行试验，结果板蓝根、金银花阴性对照试验有干扰，连翘薄层鉴别因辅料基质PEG6000干扰造成斑点成条状，故有待于进一步地摸索。
3.2含量指标的选择 黄芩中主要成分黄芩苷具有抗菌作用、抗病毒作用、抗炎作用和解热作用，还具有调节机体免疫作用、抗肿瘤作用等生物活性[5]，这与复方鱼腥草滴丸的临床适用症完全吻合。故选用黄芩苷作为本品含量测定指标具有控制意义，原标准含量测定前处理复杂，故对复方鱼腥草滴丸含量测定进行修订完善。
3.3提取条件的考察 分别对不同提取方法(超声处理、加热回流)、不同提取溶剂(甲醇、乙醇、70%乙醇)、不同提取时间(15、30、60min)进行考察，结果确定最佳提取工艺为70%乙醇超声提取30min。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中国药典一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：916-917.
[2]国家药典委员会.中国药典第二增补本[S].北京：中国医药科技出版社，2010：143.
[3]许杨彪.复方鱼腥草颗粒质量标准研究[J].中成药，2003，25(2)：121-123.
[4]王瑞，杨海英，杨琪伟，等.板蓝根质量标准研究[J].中草药，2010，41(3)：478-480
[5]雷芳.黄芩苷药理作用研究进展[J].中国药业，2010，19(15)：87-90.
编辑/安桦, 百拇医药(邬秋萍 宁火华 吴燕红 许妍 钟瑞建)
关键词：复方鱼腥草滴丸；TLC法；鱼腥草；黄芩；HPLC法；黄芩苷
复方鱼腥草滴丸由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘和金银花五味药材制备而成，具有清热解毒之功效。用于外感风热所致的急喉痹，急乳蛾，症见咽部红肿、咽痛；急性咽炎，急性扁桃体炎见上述症候者[1]。原标准TLC方法重现性、稳定性较差，含量测定方法前处理复杂，重现性差，为了更好地提高产品质量的可控性，本文对鱼腥草、黄芩进行了薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱法对方中黄芩的活性成分黄芩苷进行含量测定，为该制剂生产提供了质量控制依据。
1 仪器与试药
岛津LC-20AD高效液相色谱仪，Labsolution工作站，PDA检测器。
黄芩苷对照品(批号为110715-201117)，鱼腥草对照药材(批号为121046-200403)均购自中国食品药品检定研究院。复方鱼腥草滴丸及处方中5味药材由江西天施康中药股份有限公司提供。硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)，水为超纯水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1鱼腥草的薄层鉴别 取本品5g，加水20ml，加热回流30min，放冷，离心，取上清液，用氨水调节pH值11～12，用乙酸乙酯振摇提取2次，30ml/次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为样品溶液。另取鱼腥草对照药材0.5g，加水50ml，煎煮30min，滤过，浓缩滤液至约20ml，用氨水调节pH值11～12，同法制成对照药材溶液。取缺鱼腥草药材的阴性样品5g，按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，分别吸取样品溶液10μl、对照溶液5μl，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热约1min，置紫外光灯(365nm)下检视。结果样品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光主斑点。阴性对照液无干扰，见图1。
2.2黄芩的薄层鉴别 取本品2g，加温水20ml，超声提取10min，用稀盐酸调节pH值1.5～2.0，80℃保温1h，离心，弃去上清液，沉淀用水洗涤2次，残渣加2ml甲醇使溶解，作为样品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。取缺黄芩药材的阴性样品2g，按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，分别吸取样品溶液1μl、对照溶液5μl，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。结果样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照液无干扰，见图2。
2.3含量测定
2.3.1色谱条件 色谱柱为Ultimate XB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(45：55：0.2)；流速：1.0ml/min；检测波长：315nm，进样量：10μl。
2.3.2对照溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
2.3.3样品溶液的制备 取本品，研碎，取约0.2g，精密称定，置100ml量瓶中，加70%乙醇60ml，超声提取30min，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，作为样品溶液。
2.3.4阴性对照溶液的制备 取缺黄芩的模拟制剂约0.2g，按样品溶液的制备方法制备，即得。
2.3.5方法专属性考察 按上述色谱条件分别进样供试品溶液、黄芩苷对照品和缺黄芩阴性对照溶液，结果阴性对照无干扰(见图3)。
2.3.6标准曲线的制备 分别精密吸取对照品溶液(其浓度为0.204491mg/ml)1ml、5ml，置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液Ⅰ、Ⅱ；再分别精密吸取对照品溶液Ⅰ、Ⅱ各5μl、10μl、20μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品进样量为横坐标X，峰面积积分值为纵坐标Y，得回归方程：Y=3148105.2462x-26698.8788，R2=0.9999，表明黄芩苷在0.10255～2.04491μg内线性关系良好。
2.3.7精密度试验 精密吸取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，连续进样7次，结果黄芩苷峰面积RSD为0.1%。
2.3.8稳定性试验 精密吸取同一样品溶液分别于0、1、2、4、8、14、24h进样10μl，测定黄芩苷的峰面积，计算其RSD为0.2%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.3.9重复性试验 精密称取同一批号样品(批号12120901) 6份，按"2.3.3"项下方法制备样品溶液，进样，测定，结果黄芩苷平均含量(n=6)为29.9528mg/g，RSD为0.7%。
2.3.10加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(其批号12120901)约0.1g，置100ml量瓶中，精密添加对照品溶液(0.063236mg/ml)各50ml，按"2.3.3"项下方法制备样品溶液， 依法测定。结果黄芩苷平均回收率为98.94%，RSD=1.3%。
2.3.11样品测定 取3批样品，按"2.3.3"项下方法制备样品溶液，依法测定，结果批号为12120201、12120901、12121101的样品中黄芩苷含量分别为76.53mg/粒、76.18mg/粒、78.98mg/粒。
3 讨论
3.1薄层鉴别试验 鱼腥草为方中君药，现标准仅以甲基正壬酮为对照对产品中鱼腥草进行薄层鉴别，不能较全面的对其进行质量控制，故参照文献[2]，以鱼腥草对照药材进行薄层鉴别，结果该方法分离效果好，重现性较好，阴性对照无干扰，表明该方法专属性强，可作为本制剂定性检测的指标。同时参考文献[3，4]，以板蓝根、连翘对照药材，黄芩苷、绿原酸对照品为对照进行试验，结果板蓝根、金银花阴性对照试验有干扰，连翘薄层鉴别因辅料基质PEG6000干扰造成斑点成条状，故有待于进一步地摸索。
3.2含量指标的选择 黄芩中主要成分黄芩苷具有抗菌作用、抗病毒作用、抗炎作用和解热作用，还具有调节机体免疫作用、抗肿瘤作用等生物活性[5]，这与复方鱼腥草滴丸的临床适用症完全吻合。故选用黄芩苷作为本品含量测定指标具有控制意义，原标准含量测定前处理复杂，故对复方鱼腥草滴丸含量测定进行修订完善。
3.3提取条件的考察 分别对不同提取方法(超声处理、加热回流)、不同提取溶剂(甲醇、乙醇、70%乙醇)、不同提取时间(15、30、60min)进行考察，结果确定最佳提取工艺为70%乙醇超声提取30min。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中国药典一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：916-917.
[2]国家药典委员会.中国药典第二增补本[S].北京：中国医药科技出版社，2010：143.
[3]许杨彪.复方鱼腥草颗粒质量标准研究[J].中成药，2003，25(2)：121-123.
[4]王瑞，杨海英，杨琪伟，等.板蓝根质量标准研究[J].中草药，2010，41(3)：478-480
[5]雷芳.黄芩苷药理作用研究进展[J].中国药业，2010，19(15)：87-90.
编辑/安桦, 百拇医药(邬秋萍 宁火华 吴燕红 许妍 钟瑞建)