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编号:12872020
复方鱼腥草滴丸质量标准研究
http://www.100md.com 2016年5月21日 《医学信息》 2016年第20期
     摘要:目的 建立复方鱼腥草滴丸的质量标准。方法 采用TLC法对处方中鱼腥草、黄芩进行定性鉴别,采用HPLC法测定黄芩中黄芩苷的含量。结果 在TLC中均能检出鱼腥草,黄芩,且斑点清晰,专属性强,阴性对照无干扰;黄芩苷在0.10255~2.04491μg内呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.94%(n=6),RSD=1.3%。结论 所建立的方法准确、可靠、专属性强,可以用于该制剂的质量控制。

    关键词:复方鱼腥草滴丸;TLC法;鱼腥草;黄芩;HPLC法;黄芩苷

    复方鱼腥草滴丸由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘和金银花五味药材制备而成,具有清热解毒之功效。用于外感风热所致的急喉痹,急乳蛾,症见咽部红肿、咽痛;急性咽炎,急性扁桃体炎见上述症候者[1]。原标准TLC方法重现性、稳定性较差,含量测定方法前处理复杂,重现性差,为了更好地提高产品质量的可控性,本文对鱼腥草、黄芩进行了薄层色谱鉴别,并采用高效液相色谱法对方中黄芩的活性成分黄芩苷进行含量测定,为该制剂生产提供了质量控制依据。

    1 仪器与试药

    岛津LC-20AD高效液相色谱仪,Labsolution工作站,PDA检测器。

    黄芩苷对照品(批号为110715-201117),鱼腥草对照药材(批号为121046-200403)均购自中国食品药品检定研究院。复方鱼腥草滴丸及处方中5味药材由江西天施康中药股份有限公司提供。硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂),水为超纯水,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。

    2 方法与结果

    2.1鱼腥草的薄层鉴别 取本品5g,加水20ml,加热回流30min,放冷,离心,取上清液,用氨水调节pH值11~12,用乙酸乙酯振摇提取2次,30ml/次,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加无水乙醇1ml溶解,作为样品溶液。另取鱼腥草对照药材0.5g,加水50ml,煎煮30min,滤过,浓缩滤液至约20ml,用氨水调节pH值11~12,同法制成对照药材溶液。取缺鱼腥草药材的阴性样品5g,按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验,分别吸取样品溶液10μl、对照溶液5μl,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(4∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热约1min,置紫外光灯(365nm)下检视。结果样品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色荧光主斑点。阴性对照液无干扰,见图1。

    2.2黄芩的薄层鉴别 取本品2g,加温水20ml,超声提取10min,用稀盐酸调节pH值1.5~2.0,80℃保温1h,离心,弃去上清液,沉淀用水洗涤2次,残渣加2ml甲醇使溶解,作为样品溶液。另取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。取缺黄芩药材的阴性样品2g,按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验,分别吸取样品溶液1μl、对照溶液5μl,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铁乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰。结果样品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照液无干扰,见图2。

    2.3含量测定

    2.3.1色谱条件 色谱柱为Ultimate XB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-水-磷酸(45:55:0.2);流速:1.0ml/min;检测波长:315nm,进样量:10μl。

    2.3.2对照溶液的制备 取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。

    2.3.3样品溶液的制备 取本品,研碎,取约0.2g,精密称定,置100ml量瓶中,加70%乙醇60ml,超声提取30min,放冷,加70%乙醇至刻度,摇匀,离心,取上清液,作为样品溶液。

    2.3.4阴性对照溶液的制备 取缺黄芩的模拟制剂约0.2g,按样品溶液的制备方法制备,即得。

    2.3.5方法专属性考察 按上述色谱条件分别进样供试品溶液、黄芩苷对照品和缺黄芩阴性对照溶液,结果阴性对照无干扰(见图3)。

    2.3.6标准曲线的制备 分别精密吸取对照品溶液(其浓度为0.204491mg/ml)1ml、5ml,置10ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,作为对照品溶液Ⅰ、Ⅱ;再分别精密吸取对照品溶液Ⅰ、Ⅱ各5μl、10μl、20μl,注入液相色谱仪,记录峰面积。以对照品进样量为横坐标X,峰面积积分值为纵坐标Y,得回归方程:Y=3148105.2462x-26698.8788,R2=0.9999,表明黄芩苷在0.10255~2.04491μg内线性关系良好。

    2.3.7精密度试验 精密吸取对照溶液10μl,注入液相色谱仪,连续进样7次,结果黄芩苷峰面积RSD为0.1%。

    2.3.8稳定性试验 精密吸取同一样品溶液分别于0、1、2、4、8、14、24h进样10μl,测定黄芩苷的峰面积,计算其RSD为0.2%,表明供试品溶液在24h内稳定。

    2.3.9重复性试验 精密称取同一批号样品(批号12120901) 6份,按"2.3.3"项下方法制备样品溶液,进样,测定,结果黄芩苷平均含量(n=6)为29.9528mg/g,RSD为0.7%。

    2.3.10加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(其批号12120901)约0.1g,置100ml量瓶中,精密添加对照品溶液(0.063236mg/ml)各50ml,按"2.3.3"项下方法制备样品溶液, 依法测定。结果黄芩苷平均回收率为98.94%,RSD=1.3%。

    2.3.11样品测定 取3批样品,按"2.3.3"项下方法制备样品溶液,依法测定,结果批号为12120201、12120901、12121101的样品中黄芩苷含量分别为76.53mg/粒、76.18mg/粒、78.98mg/粒。

    3 讨论

    3.1薄层鉴别试验 鱼腥草为方中君药,现标准仅以甲基正壬酮为对照对产品中鱼腥草进行薄层鉴别,不能较全面的对其进行质量控制,故参照文献[2],以鱼腥草对照药材进行薄层鉴别,结果该方法分离效果好,重现性较好,阴性对照无干扰,表明该方法专属性强,可作为本制剂定性检测的指标。同时参考文献[3,4],以板蓝根、连翘对照药材,黄芩苷、绿原酸对照品为对照进行试验,结果板蓝根、金银花阴性对照试验有干扰,连翘薄层鉴别因辅料基质PEG6000干扰造成斑点成条状,故有待于进一步地摸索。

    3.2含量指标的选择 黄芩中主要成分黄芩苷具有抗菌作用、抗病毒作用、抗炎作用和解热作用,还具有调节机体免疫作用、抗肿瘤作用等生物活性[5],这与复方鱼腥草滴丸的临床适用症完全吻合。故选用黄芩苷作为本品含量测定指标具有控制意义,原标准含量测定前处理复杂,故对复方鱼腥草滴丸含量测定进行修订完善。

    3.3提取条件的考察 分别对不同提取方法(超声处理、加热回流)、不同提取溶剂(甲醇、乙醇、70%乙醇)、不同提取时间(15、30、60min)进行考察,结果确定最佳提取工艺为70%乙醇超声提取30min。

    参考文献:

    [1]国家药典委员会.中国药典一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:916-917.

    [2]国家药典委员会.中国药典第二增补本[S].北京:中国医药科技出版社,2010:143.

    [3]许杨彪.复方鱼腥草颗粒质量标准研究[J].中成药,2003,25(2):121-123.

    [4]王瑞,杨海英,杨琪伟,等.板蓝根质量标准研究[J].中草药,2010,41(3):478-480

    [5]雷芳.黄芩苷药理作用研究进展[J].中国药业,2010,19(15):87-90.

    编辑/安桦, 百拇医药(邬秋萍 宁火华 吴燕红 许妍 钟瑞建)