白及不同收获时期的研究
摘要：白及是我县的地道药材，具有收敛止血，消肿生肌的功能。通过近年来的努力，有效解决了野生白及变家种的技术难题。为了确保人工栽培白及与野生白及的产品质量一致，实现适时采收，本课题试图通过对不同采收年限的人工白及质量进行比较试验，以寻求人工栽培白及的最佳采收时期。为制定合理的采收期提供试验依据。
关键词：白及；栽培；采收时期；研究
1 资料与方法
1.1一般资料 本次试验所采用的白及种类为紫红花白及。试验地选择桴焉乡燕岩村燕岩组秦祖兴的责任地中进行，海拔1350 m，该地的上料作物为玉米，土壤疏松、耕层深厚、肥力中等、排灌方便。该地区冬天不会出现过冷情况，夏天温度适宜，无酷暑现象，年均温14.3℃年，降雨量1100 mm左右，无霜期280 d左右，综合各种情况后可确定该地区适合中药材白及生长。
供试土壤的基本理化性状：有机质32.6 g/Kg，全氮2.15 g/Kg，全磷0.675 g/Kg，全钾10.20 g/Kg，速效氮66.325 mg/Kg，速效磷15.40 mg/Kg，速效钾18.30 mg/Kg，pH 6.3，锌0.827 μg/ml，硼2.316 μg/ml。
仪器及试药UV-2401PC紫外-可见光分光光度计(日本岛津)，METTLER AE240电子天平(梅特勒-脱利多仪器[上海]有限公司)；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：110833-200302)，蒽酮、硫酸、无水乙醇等为分析纯。
1.2试验方法
1.2.1本试验于2003年1月～2006年10月在海拔1350米的正安县桴焉乡燕岩村燕岩组秦祖兴家责任地内进行。本试验共设4个处理(①一年收获，②二年收获，③三年收获，④四年收获)，随机区组排列，重复3次。试验地总面积0.17亩(11 m×10.5 m，不含保护区)，试验地四周保护区宽度均不少于1 m。小区面积为0.009亩(3 m×2 m)，各小区共植10行，每行12窝，密度为10寸×5寸，小区与小区、小区与保护行间距50 cm。田间管理与大田生产相同。
1.2.2选择指标性成分白及多糖含量作为白及质量控制指标。分别在采收年的9月25～30日期间按照栽培1年、2年、3年、4年的白及进行采收，并在开水中煮5 min后晾干，然后置于55℃的恒温干燥箱中烘干称重送检测定指标性成分白及多糖。其测定方法为：取白及粉末(过三号筛)0.2 g(同时测定水分)，精密称定，置园底烧瓶中，精密加水50 ml，称定重量，电加热器直接加热回流1 h(保持微沸)，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 ml，加无水乙醇35 ml，摇匀，放置1 h，离心(3000转/min)5 min，倾去上清液，沉淀用热水溶解，置100 ml量瓶中，放冷，用水稀释至刻度，精密量取1 ml，照标准曲线的制备项下，称取经105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品17.80 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制得对照品储备液。精密量取对照品储备液0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1 ml，分别置10 ml刻度试管中，各加水至2.0 ml，摇匀，精密加入0.2%蒽酮-硫酸溶液6 ml，混匀，置水浴中保温10 min，取出，立即置冰浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法，在625 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制工作曲线]的方法，自“精密加入0.2%蒽酮-硫酸溶液6 ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。
1.3测定方法 中国药典对药材中多糖测定的方法有苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法，参考有关文献[1-5]及试验，苯酚-硫酸法测定本品时显色后的溶液稳定性较差，而采用蒽酮-硫酸测定本品时，结果稳定、重现性好，因此本试验采用蒽酮-硫酸法。
1.4对产量结果进行分析
2 结果与分析
2.1葡萄糖对照品工作曲线的绘制
2.1.1测定波长选择 分别精密量取D-无水葡萄糖对照品溶液和供试品溶液适量，分别置10 ml刻度试管中，加水稀释至2.0 ml，加0.2%蒽酮-硫酸溶液6 ml，混匀，置水浴中保温10 min，取出，立即置冰浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白，置分光光度计上绘制光谱图，见图1，从图中可见，葡萄糖对照品与白及供试品均在625 nm处有最大吸收。
2.1.2对照品溶液和供试品溶液显色后稳定性考察 用0.2%蒽酮-硫酸溶液对葡萄糖对照品和白及供试品溶液进行适量显色，以相应的试剂作空白，将其分别置比色皿中，应用分光光度计进行吸光度测量，将数值规定为625 nm，读数频率为10 min/次，实验时间为60 min，由表1可看出结果对照品溶液和供试品溶液显色后在1 h稳定。
1.3线性关系考察 称取经105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品17.80 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制得对照品储备液。
精密量取对照品储备液0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1ml，分别置10 ml刻度试管中，各加水至2.0 ml，摇匀，精密加入0.2%蒽酮-硫酸溶液6 ml，混匀，置水浴中保温10 min，取出，立即置冰浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法，在625 nm波长处测定吸光度，见表2。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制工作曲线。
以葡萄糖质量数(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线，见图2，线性回归方程为：A=6.0646X+0.0099，r=0.9997，试验结果表明，葡萄糖质量数在0.036～0.18 mg范围内，用0.2%蒽酮-硫酸溶液显色后的线性关系良好。
2.2不同收获年限对白及多糖的影响 经化验分析，白及多糖含量有随种植年限增加而增加的趋势，但增加幅度小，效果不明显。因而，种植年限的长短对白及指标性成分白及多糖的影响不明显，见表3。
2.3不同收获年限对白及产量的影响 白及产量随生长年限的增加而增加，第二年增长的比例较大，平均亩产白及205.13 kg，比第一年增长113.54%；第三年次之，平均亩产白及268.62 kg，比第二年的205.13 kg增长30.95%；第四年最小，平均亩产白及292.37，见表4，比第3年的平均亩产268.62千克增长8.84%。经田间观察并分析其原因，随着白及生长年限的增加，①当年栽种的白及原块茎部分腐烂，即使未烂，也丧失了生活力，在该块茎上发生新芽的能力减弱；②随着时间的增加，新生植株的密度相应增多，部分苗势明显减弱，影响了整体产量的提高；③随着生长年限的延长，小个体白及相对增多。因此，以生长2～3年的白及产量较为理想。
3 结论
在本试验研究中，随着种植年限的延长，白及质量和产量均有不同程度的提高，但对质量的影响较小，甚至可忽略不计。从既考虑白及产量，又考虑白及质量和效益的情况下，白及的收获年限以2～3年为宜。
参考文献：
[1]中国医药科技出版社.中国药典[S].2005年版一部，2005：215.
[2]杨莉，王志华，陶健生.黄芪中黄芪多糖含量测定方法的比较[J].中国医药工业杂志，2005，36(9)：562-563.
[3]徐凌川，许昌盛. 18种不同来源灵芝的多糖含量测定[J].世界科学技术，2004，6(4)：57-60.
[4]马丽耘.蒽酮-硫酸法测定灵芝多糖含量[J].首都医药，2004，(2)：51.
[5]欧阳臻，常钰，李永辉，等.桑叶多糖的提取纯化及其含量测定[J].时珍国医国药，2005，16(10)：961-962.
编辑/张燕, http://www.100md.com(郑维强 赵天鹏 周奇 艾传慧 罗光琼 周树勇)
关键词：白及；栽培；采收时期；研究
1 资料与方法
1.1一般资料 本次试验所采用的白及种类为紫红花白及。试验地选择桴焉乡燕岩村燕岩组秦祖兴的责任地中进行，海拔1350 m，该地的上料作物为玉米，土壤疏松、耕层深厚、肥力中等、排灌方便。该地区冬天不会出现过冷情况，夏天温度适宜，无酷暑现象，年均温14.3℃年，降雨量1100 mm左右，无霜期280 d左右，综合各种情况后可确定该地区适合中药材白及生长。
供试土壤的基本理化性状：有机质32.6 g/Kg，全氮2.15 g/Kg，全磷0.675 g/Kg，全钾10.20 g/Kg，速效氮66.325 mg/Kg，速效磷15.40 mg/Kg，速效钾18.30 mg/Kg，pH 6.3，锌0.827 μg/ml，硼2.316 μg/ml。
仪器及试药UV-2401PC紫外-可见光分光光度计(日本岛津)，METTLER AE240电子天平(梅特勒-脱利多仪器[上海]有限公司)；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：110833-200302)，蒽酮、硫酸、无水乙醇等为分析纯。
1.2试验方法
1.2.1本试验于2003年1月～2006年10月在海拔1350米的正安县桴焉乡燕岩村燕岩组秦祖兴家责任地内进行。本试验共设4个处理(①一年收获，②二年收获，③三年收获，④四年收获)，随机区组排列，重复3次。试验地总面积0.17亩(11 m×10.5 m，不含保护区)，试验地四周保护区宽度均不少于1 m。小区面积为0.009亩(3 m×2 m)，各小区共植10行，每行12窝，密度为10寸×5寸，小区与小区、小区与保护行间距50 cm。田间管理与大田生产相同。
1.2.2选择指标性成分白及多糖含量作为白及质量控制指标。分别在采收年的9月25～30日期间按照栽培1年、2年、3年、4年的白及进行采收，并在开水中煮5 min后晾干，然后置于55℃的恒温干燥箱中烘干称重送检测定指标性成分白及多糖。其测定方法为：取白及粉末(过三号筛)0.2 g(同时测定水分)，精密称定，置园底烧瓶中，精密加水50 ml，称定重量，电加热器直接加热回流1 h(保持微沸)，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 ml，加无水乙醇35 ml，摇匀，放置1 h，离心(3000转/min)5 min，倾去上清液，沉淀用热水溶解，置100 ml量瓶中，放冷，用水稀释至刻度，精密量取1 ml，照标准曲线的制备项下，称取经105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品17.80 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制得对照品储备液。精密量取对照品储备液0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1 ml，分别置10 ml刻度试管中，各加水至2.0 ml，摇匀，精密加入0.2%蒽酮-硫酸溶液6 ml，混匀，置水浴中保温10 min，取出，立即置冰浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法，在625 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制工作曲线]的方法，自“精密加入0.2%蒽酮-硫酸溶液6 ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。
1.3测定方法 中国药典对药材中多糖测定的方法有苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法，参考有关文献[1-5]及试验，苯酚-硫酸法测定本品时显色后的溶液稳定性较差，而采用蒽酮-硫酸测定本品时，结果稳定、重现性好，因此本试验采用蒽酮-硫酸法。
1.4对产量结果进行分析
2 结果与分析
2.1葡萄糖对照品工作曲线的绘制
2.1.1测定波长选择 分别精密量取D-无水葡萄糖对照品溶液和供试品溶液适量，分别置10 ml刻度试管中，加水稀释至2.0 ml，加0.2%蒽酮-硫酸溶液6 ml，混匀，置水浴中保温10 min，取出，立即置冰浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白，置分光光度计上绘制光谱图，见图1，从图中可见，葡萄糖对照品与白及供试品均在625 nm处有最大吸收。
2.1.2对照品溶液和供试品溶液显色后稳定性考察 用0.2%蒽酮-硫酸溶液对葡萄糖对照品和白及供试品溶液进行适量显色，以相应的试剂作空白，将其分别置比色皿中，应用分光光度计进行吸光度测量，将数值规定为625 nm，读数频率为10 min/次，实验时间为60 min，由表1可看出结果对照品溶液和供试品溶液显色后在1 h稳定。
1.3线性关系考察 称取经105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品17.80 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制得对照品储备液。
精密量取对照品储备液0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1ml，分别置10 ml刻度试管中，各加水至2.0 ml，摇匀，精密加入0.2%蒽酮-硫酸溶液6 ml，混匀，置水浴中保温10 min，取出，立即置冰浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法，在625 nm波长处测定吸光度，见表2。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制工作曲线。
以葡萄糖质量数(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线，见图2，线性回归方程为：A=6.0646X+0.0099，r=0.9997，试验结果表明，葡萄糖质量数在0.036～0.18 mg范围内，用0.2%蒽酮-硫酸溶液显色后的线性关系良好。
2.2不同收获年限对白及多糖的影响 经化验分析，白及多糖含量有随种植年限增加而增加的趋势，但增加幅度小，效果不明显。因而，种植年限的长短对白及指标性成分白及多糖的影响不明显，见表3。
2.3不同收获年限对白及产量的影响 白及产量随生长年限的增加而增加，第二年增长的比例较大，平均亩产白及205.13 kg，比第一年增长113.54%；第三年次之，平均亩产白及268.62 kg，比第二年的205.13 kg增长30.95%；第四年最小，平均亩产白及292.37，见表4，比第3年的平均亩产268.62千克增长8.84%。经田间观察并分析其原因，随着白及生长年限的增加，①当年栽种的白及原块茎部分腐烂，即使未烂，也丧失了生活力，在该块茎上发生新芽的能力减弱；②随着时间的增加，新生植株的密度相应增多，部分苗势明显减弱，影响了整体产量的提高；③随着生长年限的延长，小个体白及相对增多。因此，以生长2～3年的白及产量较为理想。
3 结论
在本试验研究中，随着种植年限的延长，白及质量和产量均有不同程度的提高，但对质量的影响较小，甚至可忽略不计。从既考虑白及产量，又考虑白及质量和效益的情况下，白及的收获年限以2～3年为宜。
参考文献：
[1]中国医药科技出版社.中国药典[S].2005年版一部，2005：215.
[2]杨莉，王志华，陶健生.黄芪中黄芪多糖含量测定方法的比较[J].中国医药工业杂志，2005，36(9)：562-563.
[3]徐凌川，许昌盛. 18种不同来源灵芝的多糖含量测定[J].世界科学技术，2004，6(4)：57-60.
[4]马丽耘.蒽酮-硫酸法测定灵芝多糖含量[J].首都医药，2004，(2)：51.
[5]欧阳臻，常钰，李永辉，等.桑叶多糖的提取纯化及其含量测定[J].时珍国医国药，2005，16(10)：961-962.
编辑/张燕, http://www.100md.com(郑维强 赵天鹏 周奇 艾传慧 罗光琼 周树勇)