HPLC测定痛泻宁颗粒中芍药苷的含量(1)
摘要：目的 本实验为了建立痛泻宁颗粒中芍药苷的测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定，采用依利特 SinoChrom ODS-BP(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸(15∶85)；体积流量：1.0 ml·min-1；检测波长：230 nm；柱温：25 ℃；进样量10 μl。结果 芍药苷进样量在0.248～2.480 μg呈良好的线性关系(r=0.9998)，平均回收率为98.52%，RSD值为1.43%(n=6)。结论 实验表明本研究方法专属性强，灵敏度高，简便、准确、重现性好，可用于痛泻宁颗粒中芍药苷的测定。
关键词：痛泻宁颗粒；芍药苷；高效液相色谱
Abstract：Objective To establish a method for the determination of paeoniflorin in Tongxiening Granule. Methods The content of paeoniflorin was determined by HPLC，Elite SinoChrom ODS-BP column (250 mm × 4.6 mm， 5 μm) was used with acetonitrile-0.1% orthophosphoric acid (15∶85) as the mobile phase at the flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was set at 230 nm and the column temperature was 25℃. The injection volume was 10 μl. Results The linear range of paeoniflorin was 0.248～2.480 μg (r=0.999 8) with an average recovery of 98.52% (RSD=1.43%， n=6). Conclusion The established method is specific， sensitive， simple， accurate， reproducible， and suitable for the quality control of paeoniflorin in Tongxiening Granule.
, http://www.100md.com
Key words：Tongxiening granule；Paeoniflorin；HPLC
痛泻宁颗粒是由白芍、青皮、白术 、薤白四味药组成的中药复方制剂，具有柔肝缓急、疏肝行气、理脾运湿的功效，用于肝气犯脾所致的腹痛、腹泻、腹胀、腹部不适等症，肠易激综合征(腹泻型)等见上述证候者。方中白芍为君药，具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛的功效，用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕[1]，其主要活性成分是芍药苷。现代药理研究表明芍药苷具有镇静、镇痛、抗炎、解痉等药理活性[2]。作者采用HPLC测定了痛泻宁颗粒中芍药苷的含量，为建立该制剂完善的质量标准提供依据。
1仪器与试药
美国Waters 高效液相色谱仪，512 HPLC 泵，486紫外检测器，Chromeleon色谱工作站；Sartorius BT 25S电子天平。
, 百拇医药
芍药苷对照品(中国药品食品检定研究院，批号110726-201236)；痛泻宁颗粒购自华佗药房，5 g/袋，批号20141001、20141002、20141003；试剂乙腈(色谱纯，Fisher chemical)，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件 色谱柱：依利特 SinoChrom ODS-BP(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸(15∶85)；体积流量：1.0 ml·min-1；检测波长：230 nm；柱温：25 ℃；进样量10 μl。
2.2对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品约6.2 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇超声溶解并加至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1 ml中含芍药苷24.8 μg)。
, http://www.100md.com 2.3供试品溶液的制备 取痛泻宁颗粒1.0 g，精密称定，置于50 ml量瓶中，加甲醇40 ml超声提取40min，取出，冷却后用甲醇溶解并加至刻度，摇匀，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4阴性对照溶液的制备 取不含白芍的阴性制剂，按供试品溶液的制备项下方法制成阴性溶液。
2.5专属性试验 取芍药苷对照品溶液、痛泻宁颗粒供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl进样测定，结果在上述色谱条件下，阴性对照无干扰，色谱图见图1。
2.6线性关系考察 分别精密吸取0.2480 mg/ml芍药苷对照品储备液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl进样，在选定的色谱条件下进行测定。以芍药苷进样量对峰面积进行回归分析，绘制标准曲线，结果芍药苷在0.248～2.480 μg呈良好的线性关系。回归方程Y=38682X-8792，r=0.999 8。
2.7精密度试验 精密量取同一份供试品溶液，每次10 μl，连续进样6次，芍药苷峰面积积分值RSD为0.75%，表明仪器精密度良好。
2.8稳定性试验 取同一对照品溶液10 μl，按上述色谱条件分别在0、2、4、8、12、24 h进样测定6次，测定芍药苷峰面积，结果RSD 值为1.02%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.9重现性试验 取同一批号的供试品6份，依法制成供试品溶液进行测定，计算芍药苷的质量分数，其RSD 值为1.08%。, 百拇医药(谷勇 侯杰荣 柯发敏 王仕潭 罗岷)
关键词：痛泻宁颗粒；芍药苷；高效液相色谱
Abstract：Objective To establish a method for the determination of paeoniflorin in Tongxiening Granule. Methods The content of paeoniflorin was determined by HPLC，Elite SinoChrom ODS-BP column (250 mm × 4.6 mm， 5 μm) was used with acetonitrile-0.1% orthophosphoric acid (15∶85) as the mobile phase at the flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was set at 230 nm and the column temperature was 25℃. The injection volume was 10 μl. Results The linear range of paeoniflorin was 0.248～2.480 μg (r=0.999 8) with an average recovery of 98.52% (RSD=1.43%， n=6). Conclusion The established method is specific， sensitive， simple， accurate， reproducible， and suitable for the quality control of paeoniflorin in Tongxiening Granule.
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Key words：Tongxiening granule；Paeoniflorin；HPLC
痛泻宁颗粒是由白芍、青皮、白术 、薤白四味药组成的中药复方制剂，具有柔肝缓急、疏肝行气、理脾运湿的功效，用于肝气犯脾所致的腹痛、腹泻、腹胀、腹部不适等症，肠易激综合征(腹泻型)等见上述证候者。方中白芍为君药，具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛的功效，用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕[1]，其主要活性成分是芍药苷。现代药理研究表明芍药苷具有镇静、镇痛、抗炎、解痉等药理活性[2]。作者采用HPLC测定了痛泻宁颗粒中芍药苷的含量，为建立该制剂完善的质量标准提供依据。
1仪器与试药
美国Waters 高效液相色谱仪，512 HPLC 泵，486紫外检测器，Chromeleon色谱工作站；Sartorius BT 25S电子天平。
, 百拇医药
芍药苷对照品(中国药品食品检定研究院，批号110726-201236)；痛泻宁颗粒购自华佗药房，5 g/袋，批号20141001、20141002、20141003；试剂乙腈(色谱纯，Fisher chemical)，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件 色谱柱：依利特 SinoChrom ODS-BP(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸(15∶85)；体积流量：1.0 ml·min-1；检测波长：230 nm；柱温：25 ℃；进样量10 μl。
2.2对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品约6.2 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇超声溶解并加至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1 ml中含芍药苷24.8 μg)。
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2.4阴性对照溶液的制备 取不含白芍的阴性制剂，按供试品溶液的制备项下方法制成阴性溶液。
2.5专属性试验 取芍药苷对照品溶液、痛泻宁颗粒供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl进样测定，结果在上述色谱条件下，阴性对照无干扰，色谱图见图1。
2.6线性关系考察 分别精密吸取0.2480 mg/ml芍药苷对照品储备液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl进样，在选定的色谱条件下进行测定。以芍药苷进样量对峰面积进行回归分析，绘制标准曲线，结果芍药苷在0.248～2.480 μg呈良好的线性关系。回归方程Y=38682X-8792，r=0.999 8。
2.7精密度试验 精密量取同一份供试品溶液，每次10 μl，连续进样6次，芍药苷峰面积积分值RSD为0.75%，表明仪器精密度良好。
2.8稳定性试验 取同一对照品溶液10 μl，按上述色谱条件分别在0、2、4、8、12、24 h进样测定6次，测定芍药苷峰面积，结果RSD 值为1.02%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.9重现性试验 取同一批号的供试品6份，依法制成供试品溶液进行测定，计算芍药苷的质量分数，其RSD 值为1.08%。, 百拇医药(谷勇 侯杰荣 柯发敏 王仕潭 罗岷)