HPLC法测定6省各等级天麻中天麻素和对羟基苯甲醇的含量
摘要：目的 HPLC法测定6省各等级天麻中天麻素和对羟基苯甲醇的含量。方法 色谱柱Agilent XDB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相乙腈-0.05%磷酸溶液(3：97)，流速1.0ml/min，检测波长220nm，柱温35℃。结果 天麻素进样量在0.04102～0.8204ug范围内与峰面积线性关系良好；对羟基苯甲醇进样量在0.02504～0.5008ug范围内与峰面积线性关系良好。结论 检测出天麻6省各等级中天麻素和对羟基苯甲醇的含量。
关键词：天麻；高效液相色谱法；天麻素对羟基苯甲醇
天麻为兰科植物天麻(Gastrodia elata Blume)的干燥块茎，具息风止痉；平肝阳；祛风通络功效。现全国各地均有栽培，以甘肃、云南、湖北、贵州、安徽、陕西、四川等为大产区。《中国药典》2015版新增对羟基苯甲醇含量为天麻质量的控制指标，本课题对6省各等级天麻中天麻素和对羟基苯甲醇的含量进行检测，现将结果报道如下。
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1 仪器与试药
岛津LC-20A高效液相色谱仪；Sartorius-ME215S电子天平。天麻素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110807-200205)；对羟基苯甲醇对照品(Lot No：NJ141012-17，USA)；色谱乙腈，超纯水，其余试剂为分析纯；天麻样品为6省基地采集加工后的成品。
2 方法与结果
2.1色谱条件 色谱柱Agilent XDB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相乙腈-0.05%磷酸溶液(3：97)，流速1.0ml/min，检测波长220nm，柱温35℃；进样量：5μl。
2.2溶液制备
2.2.1对照品溶液的制备精密称取对照品，加甲醇制成每1ml含天麻素0.04102mg、对羟基苯甲醇0.02504mg的混合溶液，即得。
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2.2.2供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率120W，频率40kHz)30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10ml，浓缩至近干无醇味，残渣加乙腈-水(3：97)混合溶液溶解，转移至25ml量瓶中，用乙腈-水(3：97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3方法学考察
2.3.1系统适应性实验取上述溶液进样，记录色谱图。理论塔板数按天麻素峰计算大于5000，分离度大于1.5，见图1。
2.3.2线性关系考察取混合对照品溶液，分别进样1μl、2μl、4μl、10μl、20μl，以进样量(X)对峰面积(Y)作线性回归，天麻素得回归方程为：Y=2000000.0000x+5464.2000，r=0.9997表明进样量在0.04102～0.8204ug范围内线性关系良好；对羟基苯甲醇得回归方程为：Y=3000000.0000x+9823.1000，r=0.9999表明进样量在0.02504～0.5008ug范围内线性关系良好。
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2.3.3精密度试验：取混合对照品溶液，连续测定6次，结果天麻素、对羟基苯甲醇的峰面积的RSD分别为0.3%、0.3%(n=6)。
2.3.4重复性试验：精密取同一批天麻，按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液测定，天麻素、对羟基苯甲醇含量的RSD分别为0.2%、0.1%(n=6)。表明此方法重复性良好。
2.3.5稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h进样5μl，结果天麻素、对羟基苯甲醇峰面积的RSD分别为0.2%、0.2%。表明供试品溶液在24h内稳定。
2.3.6加样回收试验：取已知含量天麻6份，精密加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定，计算回收率，结果对天麻素、羟基苯甲醇平均回收率分别为98.37%、98.85%，RSD%分别为0.27%、0.69%(n=6)，见表1。
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2.4样品测定 取天麻样品，测定，见表2。
由上结果可以得出：①按《中国药典》2015版一部标准，按干燥品计算，含天麻素(C13H18O7)和对羟基苯甲醇(C7H8O2)的总量不得少于0.25%，所有天麻含量均合格；②从等级含量来看，天麻等级和其含量并不成正比，如甘肃产特级、四川产特级与陕西产特级，均为同批天麻的最低水平，而四川产三级为同批天麻最高。
3 讨论
云南产为乌天麻，四川产为乌红天麻，其余各省天麻均为红天麻，从上数据来看，乌天麻与乌红天麻天麻素和对羟基苯甲醇的总量与红天麻并无太大差异；云南产与四川产天麻比较厚实，水分比较高，干燥难度较大，对天麻素和对羟基苯甲醇含量有一定影响。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版，2015.
编辑/安桦, http://www.100md.com(吕紫璇 车早红 唐瑜 陈建 张传平 刘前林)
关键词：天麻；高效液相色谱法；天麻素对羟基苯甲醇
天麻为兰科植物天麻(Gastrodia elata Blume)的干燥块茎，具息风止痉；平肝阳；祛风通络功效。现全国各地均有栽培，以甘肃、云南、湖北、贵州、安徽、陕西、四川等为大产区。《中国药典》2015版新增对羟基苯甲醇含量为天麻质量的控制指标，本课题对6省各等级天麻中天麻素和对羟基苯甲醇的含量进行检测，现将结果报道如下。
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1 仪器与试药
岛津LC-20A高效液相色谱仪；Sartorius-ME215S电子天平。天麻素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110807-200205)；对羟基苯甲醇对照品(Lot No：NJ141012-17，USA)；色谱乙腈，超纯水，其余试剂为分析纯；天麻样品为6省基地采集加工后的成品。
2 方法与结果
2.1色谱条件 色谱柱Agilent XDB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相乙腈-0.05%磷酸溶液(3：97)，流速1.0ml/min，检测波长220nm，柱温35℃；进样量：5μl。
2.2溶液制备
2.2.1对照品溶液的制备精密称取对照品，加甲醇制成每1ml含天麻素0.04102mg、对羟基苯甲醇0.02504mg的混合溶液，即得。
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2.2.2供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率120W，频率40kHz)30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10ml，浓缩至近干无醇味，残渣加乙腈-水(3：97)混合溶液溶解，转移至25ml量瓶中，用乙腈-水(3：97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3方法学考察
2.3.1系统适应性实验取上述溶液进样，记录色谱图。理论塔板数按天麻素峰计算大于5000，分离度大于1.5，见图1。
2.3.2线性关系考察取混合对照品溶液，分别进样1μl、2μl、4μl、10μl、20μl，以进样量(X)对峰面积(Y)作线性回归，天麻素得回归方程为：Y=2000000.0000x+5464.2000，r=0.9997表明进样量在0.04102～0.8204ug范围内线性关系良好；对羟基苯甲醇得回归方程为：Y=3000000.0000x+9823.1000，r=0.9999表明进样量在0.02504～0.5008ug范围内线性关系良好。
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2.3.3精密度试验：取混合对照品溶液，连续测定6次，结果天麻素、对羟基苯甲醇的峰面积的RSD分别为0.3%、0.3%(n=6)。
2.3.4重复性试验：精密取同一批天麻，按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液测定，天麻素、对羟基苯甲醇含量的RSD分别为0.2%、0.1%(n=6)。表明此方法重复性良好。
2.3.5稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h进样5μl，结果天麻素、对羟基苯甲醇峰面积的RSD分别为0.2%、0.2%。表明供试品溶液在24h内稳定。
2.3.6加样回收试验：取已知含量天麻6份，精密加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定，计算回收率，结果对天麻素、羟基苯甲醇平均回收率分别为98.37%、98.85%，RSD%分别为0.27%、0.69%(n=6)，见表1。
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2.4样品测定 取天麻样品，测定，见表2。
由上结果可以得出：①按《中国药典》2015版一部标准，按干燥品计算，含天麻素(C13H18O7)和对羟基苯甲醇(C7H8O2)的总量不得少于0.25%，所有天麻含量均合格；②从等级含量来看，天麻等级和其含量并不成正比，如甘肃产特级、四川产特级与陕西产特级，均为同批天麻的最低水平，而四川产三级为同批天麻最高。
3 讨论
云南产为乌天麻，四川产为乌红天麻，其余各省天麻均为红天麻，从上数据来看，乌天麻与乌红天麻天麻素和对羟基苯甲醇的总量与红天麻并无太大差异；云南产与四川产天麻比较厚实，水分比较高，干燥难度较大，对天麻素和对羟基苯甲醇含量有一定影响。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版，2015.
编辑/安桦, http://www.100md.com(吕紫璇 车早红 唐瑜 陈建 张传平 刘前林)