10%尿素乳膏微生物限度检查方法适用性试验的研究(1)
摘要：目的 建立10%尿素乳膏的微生物限度检查方法。方法 常规法。结论 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的计数采用常规的平皿倾注法，控制菌的检查采用常规法。
关键词：10%尿素乳膏；微生物限度检验法；方法适用性试验
Study on the Aapplicability Test of Microbial Limits Test of 10% Urea Cream
FANG Min
(Institute for Food and Drug Control，Suzhou 234000，Anhui，China)
Abstract：Objective To establish microbial limit test for 10% urea cream .Methods Common method.Conclusion Routine pour-plate method was used for the total aerobic microbial count，total yeasts and mold count. The conventional method can be used for the test of control bacteria.
, http://www.100md.com
Key words：10% urea cream； Microbial limits test；Applicability test
尿素乳膏，为皮肤外用药。适用于皮肤角化症，手足皲裂，干皮症、鱼鳞病等。为保证所采用的检验方法适合于该药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的计数以及控制菌的检查，确认供试液制备、测定方法及检测系统适用于该药品的检验，本文参照《中国药典》[1]2015年版第三部通则"1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法"以及"1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法"、《中国药品检验标准操作规范》[2]，建立10%尿素乳膏微生物限度检验方法并进行方法适用性试验，结果报道如下。
1 资料与方法
1.1试验环境 根据2015年版《中国药典》第三部"9203药品微生物质量管理原则"[3]规定，试验在环境洁净度B级、局部洁净度A级的单向流空气的无菌室进行，阳性菌操作在符合国家Ⅱ级生物安全标准的生物安全柜内进行。
, 百拇医药
1.2实验仪器 MJX-160B-Z型微电脑霉菌培养箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)、DYX-DHS型隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)、GHP-9162型电热恒温培养箱(上海金慧科电子有限公司)、BHC-1300ⅡA2型生物安全柜(苏州苏净仪器自控设备有限公司)、YXQ-LS-75SⅡ型立式压力蒸汽灭菌器(上海市博讯实业有限公司医疗设备厂)、TZQ-Ⅱ型匀质器型号(天津市津德实验仪器技术开发中心)。
1.3供试品 10%尿素乳膏，宿州亿帆药业有限公司(批号：160101，160102，160103)。
1.4稀释剂 0.1%无菌吐温溶液、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(自配)。
1.5培养基 胰酪大豆胨液体培养基(TSB)(批号为20151211
0-00)、胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)(批号为20160111-00)、沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)(批号为20151110-00)、甘露醇氯化钠琼脂培养基(批号为20150716-00)、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基(批号20151026-00)。以上均由杭州微生物试剂有限公司提供。
, 百拇医药
根据2015年版《中国药典》第三部通则的规定，计数培养基符合计数培养基适用性检查的要求；控制菌检查用培养基符合促生长能力、抑制能力及指示特性的要求。
1.6试验菌种 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B) 63 501]、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26 003]、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B) 10 104]、白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98 001]、黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F) 98 003] ，试验用菌株的传代次数为3代。
所用菌种，黑曲霉菌由中国药品生物制品检定所提供，其余菌种均由中国医学菌种保藏中心提供。
2 结果
, 百拇医药 2.1菌液的制备与检验
2.1.1菌液的制备 取经35℃培养18～24 h的枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌的TSB培养物1 ml，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释，枯草芽孢杆菌至10-5、铜绿假单胞菌至10-6、金黄色葡萄球菌至10-8，备用；取经25℃培养2～3 d的白色念珠菌液体培养物1 ml，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至10-5，做活菌计数备用；取经25℃培养1 w的黑曲霉斜面培养物，加4ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液洗下黑曲霉孢子，吸取出孢子悬液1 ml，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至10-6，做活菌计数备用。
2.1.2菌液的检验 取2.1.1铜绿假单胞菌10-6、枯草芽孢杆菌10-5、金黄色葡萄球菌10-8、白色念珠菌10-5稀释液及上述黑曲霉10-6孢子悬液各0.1 ml，分别用45℃胰酪大豆胨琼脂培养基20 ml注皿，各平行测定两皿，铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌30℃～35℃培养3 d，计数；白色念珠菌、黑曲霉30℃～35℃培养5 d，计数，均应不大于100cfu；取上述白色念珠菌10-5稀释液及上述黑曲霉10-6孢子悬液各0.1 ml，分别用45℃沙氏葡萄糖琼脂培养基20 ml注皿，各平行测定两皿，20℃～25℃培养培养5 d，计数，均应不大于100cfu。试验结果见表1，符合要求。, http://www.100md.com(方敏)
关键词：10%尿素乳膏；微生物限度检验法；方法适用性试验
Study on the Aapplicability Test of Microbial Limits Test of 10% Urea Cream
FANG Min
(Institute for Food and Drug Control，Suzhou 234000，Anhui，China)
Abstract：Objective To establish microbial limit test for 10% urea cream .Methods Common method.Conclusion Routine pour-plate method was used for the total aerobic microbial count，total yeasts and mold count. The conventional method can be used for the test of control bacteria.
, http://www.100md.com
Key words：10% urea cream； Microbial limits test；Applicability test
尿素乳膏，为皮肤外用药。适用于皮肤角化症，手足皲裂，干皮症、鱼鳞病等。为保证所采用的检验方法适合于该药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的计数以及控制菌的检查，确认供试液制备、测定方法及检测系统适用于该药品的检验，本文参照《中国药典》[1]2015年版第三部通则"1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法"以及"1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法"、《中国药品检验标准操作规范》[2]，建立10%尿素乳膏微生物限度检验方法并进行方法适用性试验，结果报道如下。
1 资料与方法
1.1试验环境 根据2015年版《中国药典》第三部"9203药品微生物质量管理原则"[3]规定，试验在环境洁净度B级、局部洁净度A级的单向流空气的无菌室进行，阳性菌操作在符合国家Ⅱ级生物安全标准的生物安全柜内进行。
, 百拇医药
1.2实验仪器 MJX-160B-Z型微电脑霉菌培养箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)、DYX-DHS型隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)、GHP-9162型电热恒温培养箱(上海金慧科电子有限公司)、BHC-1300ⅡA2型生物安全柜(苏州苏净仪器自控设备有限公司)、YXQ-LS-75SⅡ型立式压力蒸汽灭菌器(上海市博讯实业有限公司医疗设备厂)、TZQ-Ⅱ型匀质器型号(天津市津德实验仪器技术开发中心)。
1.3供试品 10%尿素乳膏，宿州亿帆药业有限公司(批号：160101，160102，160103)。
1.4稀释剂 0.1%无菌吐温溶液、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(自配)。
1.5培养基 胰酪大豆胨液体培养基(TSB)(批号为20151211
0-00)、胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)(批号为20160111-00)、沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)(批号为20151110-00)、甘露醇氯化钠琼脂培养基(批号为20150716-00)、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基(批号20151026-00)。以上均由杭州微生物试剂有限公司提供。
, 百拇医药
根据2015年版《中国药典》第三部通则的规定，计数培养基符合计数培养基适用性检查的要求；控制菌检查用培养基符合促生长能力、抑制能力及指示特性的要求。
1.6试验菌种 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B) 63 501]、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26 003]、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B) 10 104]、白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98 001]、黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F) 98 003] ，试验用菌株的传代次数为3代。
所用菌种，黑曲霉菌由中国药品生物制品检定所提供，其余菌种均由中国医学菌种保藏中心提供。
2 结果
, 百拇医药 2.1菌液的制备与检验
2.1.1菌液的制备 取经35℃培养18～24 h的枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌的TSB培养物1 ml，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释，枯草芽孢杆菌至10-5、铜绿假单胞菌至10-6、金黄色葡萄球菌至10-8，备用；取经25℃培养2～3 d的白色念珠菌液体培养物1 ml，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至10-5，做活菌计数备用；取经25℃培养1 w的黑曲霉斜面培养物，加4ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液洗下黑曲霉孢子，吸取出孢子悬液1 ml，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至10-6，做活菌计数备用。
2.1.2菌液的检验 取2.1.1铜绿假单胞菌10-6、枯草芽孢杆菌10-5、金黄色葡萄球菌10-8、白色念珠菌10-5稀释液及上述黑曲霉10-6孢子悬液各0.1 ml，分别用45℃胰酪大豆胨琼脂培养基20 ml注皿，各平行测定两皿，铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌30℃～35℃培养3 d，计数；白色念珠菌、黑曲霉30℃～35℃培养5 d，计数，均应不大于100cfu；取上述白色念珠菌10-5稀释液及上述黑曲霉10-6孢子悬液各0.1 ml，分别用45℃沙氏葡萄糖琼脂培养基20 ml注皿，各平行测定两皿，20℃～25℃培养培养5 d，计数，均应不大于100cfu。试验结果见表1，符合要求。, http://www.100md.com(方敏)