鼻咽癌患者血浆EBV DNA和VCA—IgA联合检测及临床意义(1)
摘要：目的 探讨血浆EBV DNA 和VCA-IgA联合检测在监测鼻咽癌患者放疗后复发和转移中的临床价值。方法 分别采用荧光定量PCR法和常规免疫酶法检测放疗前后各组鼻咽癌患者血浆EBV DNA含量与血浆VCA-IgA滴度，并进行比较分析。结果 放疗前组(初诊)患者血浆EBV DNA和VCA-IgA阳性率显著高于放疗后缓解组(P<0.01)，与复发或转移组比较无显著性差异(P>0.05)；复发或转移组与放疗后缓解组比较有显著性差异(P<0.01)。结论 血浆EBV DNA和VCA-IgA的联合检测是监测鼻咽癌患者放疗后复发和转移的有效标记物。
关键词：鼻咽癌；EB病毒DNA；EB病毒壳抗原IgA
Clinical Significance of Plasma EBV DNA and VCA-IgA for Nasopharyngeal Carcinoma
SUN Qi ， DENG Zhan-feng， SHI Shun-chang， SUN Jian-guang
, http://www.100md.com
(Affilicated Hospital of Shaoyang Medical College， Shaoyang 422000，Hunan，China)
Abstract：Objective To evaluate the clinical significance of quantitative analysis of EBV DNA and VCA-IgA in plasma of nasopharyngeal carcinoma patients after curative radiotherapy. Methods Using the method of PCR to test plasma EBV DNA and the method of immunoenzyme to test VCA-IgA. Results The positive rates of XRT Preoperative radiotherapy groups was significantly higher than clinical remission groups (P<0.01)， and there is no statistical significance between clinical remission and recurrent groups(P>0.05). However， There were significant difference in recurrent or metastasis groups and clinical remission(P<0.01) . Conclusion The detection of Plasma EBV DNA and VCA-IgA is useful for surveillance of nasopharynged carcinoma patients following radiotherapy. The simultaneous combination tests can rise advantage to each other.
, 百拇医药
Key words：Nasopharyngeal Carcinoma；EBV DNA ； VCA-IgA
鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我国常见的恶性肿瘤，其病因是多方面的，现已证实EB病毒(Epstein Barr Virus，EBV)与鼻咽癌密切相关。在鼻咽癌的发展过程中，EBV感染和多体细胞遗传和表观遗传变化协同地破坏正常细胞的功能，引起鼻咽癌的发生[1]。目前已公认，放疗是治疗鼻咽癌的主要手段。虽然随着医疗水平的提高和放疗设备及技术的更新，鼻咽癌的疗效有了明显提高，但放疗后缓解的患者仍有约30%～40%因复发或转移导致治疗失败[2]。因此，探求一种能有效监测鼻咽癌患者放疗后复发和远处转移的方法，对提高鼻咽癌患者的生存率有重要意义。本研究通过血浆EBV DNA和VCA-IgA两种肿瘤标记物的联合检测来探讨其在监测鼻咽癌患者复发和转移中的临床价值。
1 资料与方法
, 百拇医药
1.1一般资料 选择2013年1月～2015年1月，初诊在我院耳鼻咽喉科病理确诊后接受根治性放疗的鼻咽癌患者68例，其中男47例，女性21例，年龄21～78岁，中位年龄48岁。放疗结束后每3个月随访1次，截止时间为2016年1月。随访时对患者进行常规体检及间接鼻咽镜、鼻咽CT、胸片、腹部B超检查，对可疑局部复发者则行纤维鼻咽镜活检，可疑远处转移者加用其他检查手段。在随访过程中，经临床检查证实放疗后缓解42例，局部复发10例，远处转移16例。分别采取放疗前组(初诊)、放疗后缓解组和放疗后复发或转移组患者清晨空腹肘静脉血5 ml，放入EDTA抗凝管中，离心分离得血浆，置于-20℃冻存待测。
1.2方法 样本DNA抽提与荧光定量PCR反应。冻存的血浆置于4℃解冻，每例标本取50ul血浆，用QIAamp血液DNA提取试剂盒(德国Qiagen公司)抽提DNA。抽提方法按试剂盒说明书进行。荧光定量PCR反应测定血浆EBV DNA水平。EB病毒核酸扩增荧光检测试剂盒购买自中山大学达安基因股份有限公司，包括DNA提取液、临界阳性质控品、强阳性质控品、阳性标准品、阴性质控品以及PCR反应管等。用上海枫林FTC-2000实时荧光定量PCR仪进行检测，检测步骤、结果判断以及质量控制方法按厂家说明。血浆EBV DNA>0 copies/ml为阳性。
1.3免疫酶法检测血清VCA-IgA滴度 用常规的免疫酶法检测血清VCA-IgA滴度。血浆VCA-IgA滴度≥1∶10为阳性。
1.4统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计分析，数据用中位数表示，样本比较用u检验。, 百拇医药(孙琦 邓展锋 史顺畅 孙剑光)
关键词：鼻咽癌；EB病毒DNA；EB病毒壳抗原IgA
Clinical Significance of Plasma EBV DNA and VCA-IgA for Nasopharyngeal Carcinoma
SUN Qi ， DENG Zhan-feng， SHI Shun-chang， SUN Jian-guang
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(Affilicated Hospital of Shaoyang Medical College， Shaoyang 422000，Hunan，China)
Abstract：Objective To evaluate the clinical significance of quantitative analysis of EBV DNA and VCA-IgA in plasma of nasopharyngeal carcinoma patients after curative radiotherapy. Methods Using the method of PCR to test plasma EBV DNA and the method of immunoenzyme to test VCA-IgA. Results The positive rates of XRT Preoperative radiotherapy groups was significantly higher than clinical remission groups (P<0.01)， and there is no statistical significance between clinical remission and recurrent groups(P>0.05). However， There were significant difference in recurrent or metastasis groups and clinical remission(P<0.01) . Conclusion The detection of Plasma EBV DNA and VCA-IgA is useful for surveillance of nasopharynged carcinoma patients following radiotherapy. The simultaneous combination tests can rise advantage to each other.
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Key words：Nasopharyngeal Carcinoma；EBV DNA ； VCA-IgA
鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我国常见的恶性肿瘤，其病因是多方面的，现已证实EB病毒(Epstein Barr Virus，EBV)与鼻咽癌密切相关。在鼻咽癌的发展过程中，EBV感染和多体细胞遗传和表观遗传变化协同地破坏正常细胞的功能，引起鼻咽癌的发生[1]。目前已公认，放疗是治疗鼻咽癌的主要手段。虽然随着医疗水平的提高和放疗设备及技术的更新，鼻咽癌的疗效有了明显提高，但放疗后缓解的患者仍有约30%～40%因复发或转移导致治疗失败[2]。因此，探求一种能有效监测鼻咽癌患者放疗后复发和远处转移的方法，对提高鼻咽癌患者的生存率有重要意义。本研究通过血浆EBV DNA和VCA-IgA两种肿瘤标记物的联合检测来探讨其在监测鼻咽癌患者复发和转移中的临床价值。
1 资料与方法
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1.1一般资料 选择2013年1月～2015年1月，初诊在我院耳鼻咽喉科病理确诊后接受根治性放疗的鼻咽癌患者68例，其中男47例，女性21例，年龄21～78岁，中位年龄48岁。放疗结束后每3个月随访1次，截止时间为2016年1月。随访时对患者进行常规体检及间接鼻咽镜、鼻咽CT、胸片、腹部B超检查，对可疑局部复发者则行纤维鼻咽镜活检，可疑远处转移者加用其他检查手段。在随访过程中，经临床检查证实放疗后缓解42例，局部复发10例，远处转移16例。分别采取放疗前组(初诊)、放疗后缓解组和放疗后复发或转移组患者清晨空腹肘静脉血5 ml，放入EDTA抗凝管中，离心分离得血浆，置于-20℃冻存待测。
1.2方法 样本DNA抽提与荧光定量PCR反应。冻存的血浆置于4℃解冻，每例标本取50ul血浆，用QIAamp血液DNA提取试剂盒(德国Qiagen公司)抽提DNA。抽提方法按试剂盒说明书进行。荧光定量PCR反应测定血浆EBV DNA水平。EB病毒核酸扩增荧光检测试剂盒购买自中山大学达安基因股份有限公司，包括DNA提取液、临界阳性质控品、强阳性质控品、阳性标准品、阴性质控品以及PCR反应管等。用上海枫林FTC-2000实时荧光定量PCR仪进行检测，检测步骤、结果判断以及质量控制方法按厂家说明。血浆EBV DNA>0 copies/ml为阳性。
1.3免疫酶法检测血清VCA-IgA滴度 用常规的免疫酶法检测血清VCA-IgA滴度。血浆VCA-IgA滴度≥1∶10为阳性。
1.4统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计分析，数据用中位数表示，样本比较用u检验。, 百拇医药(孙琦 邓展锋 史顺畅 孙剑光)