糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌细胞凋亡相关蛋白Bcl—2与Bax的表达与意义(1)
摘要：目的 观察Bcl-2与Bax在糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌细胞中的变化，探讨其在糖尿病胃轻瘫发生中的意义。方法 成年SD大鼠20只，链脲佐菌素(STZ)诱导制备糖尿病大鼠模型，另取20只作为正常对照组，饲养6 w后处死取胃组织。利用免疫组织化学染色检测胃平滑肌组织Bcl-2与Bax的表达。结果 正常对照组Bcl-2显色指数(5.68±3.24)；糖尿病组Bcl-2显色指数(1.58±0.72)；两组比较有明显差异P<0.01。而Bax在正常对照组显色指数(1.74±0.75)；在糖尿病组显色指数(5.75±2.12)，两组比较有明显差异P<0.01。结论 Bcl-2 与Bax表达的变化可能在糖尿病胃轻瘫的发生中发挥重要作用。
关键词：糖尿病；胃轻瘫；Bcl-2；Bax；表达
中图分类号：R587.1 文献标识码：A 文章编号：1006-1959(2017)13-0083-02
Abstract：Objective To observe the changes of Bcl-2 and Bax in gastric smooth muscle cells of diabetic gastroparesis rats，and to explore the significance of Bcl-2 and Bax in the pathogenesis of diabetic gastroparesis.Methods 20 adult SD rats， streptozotocin(STZ)induced by preparation of diabetic rat model，another 20 rats as normal control group，feeding 6 w were obtained by the expression of gastric tissue.Immunohistochemical staining of Bcl-2 and Bax in gastric smooth muscle tissue.Results The normal control group Bcl-2 color index(5.68±3.24)；diabetes mellitus group Bcl-2 color index(1.58±0.72)；there was significant difference between the two groups，P<0.01.But Bax in the normal control group the color index(1.74±0.75)；In diabetic group，the color rendering index(5.75±2.12)was significantly different between the two groups.P<0.01.Conclusion Bcl-2 and Bax expression may play an important role in the development of diabetic gastroparesis.
, 百拇医药
Key words：Diabetes mellitus；Gastroparesis；Bcl-2；Bax；Expression
胃轻瘫是糖尿病常见的慢性并发症之一，主要表现为胃动力低下、胃排空延迟、胃转运时间延长等引起的腹胀、恶心、呕吐等。至今糖尿病所致胃轻瘫的机理仍不完全清楚[1]。Bcl-2与Bax共属于一个家族，通过控制线粒体膜的通透性来调节凋亡激活物。bax二聚体在膜上打开通道，增加通透性；bcl-2與bax形成异聚体，降低通透性。所以，bcl-2水平的升高和bax的降低表明细胞对凋亡的抵抗性增强，应该是保护药物起作用的标志；而反之则相反。研究发现，糖尿病大鼠成模6 w后出现胃轻瘫机体症状，并发生胃平滑肌细胞凋亡[2]。为探讨Bcl-2与Bax在糖尿病胃轻瘫中的变化及作用，本实验以糖尿病胃轻瘫模型大鼠为研究对象，观察了胃平滑肌细胞的Bcl-2与Bax蛋白与基因的表达，旨在进一步阐明糖尿病胃轻瘫的发生机制，为临床探索新的治疗方案提供科学的理论依据与实验依据。
, 百拇医药
1 材料与方法
1 材料与试剂
成年SD雄性大鼠40只，雌雄不限，体重200～220 g，由延边大学实验动物中心提供。链脲佐菌素(STZ)(SIGMA)，Bcl-2、Bax抗体(Cell Signaling)，即用型SABC免疫组化试剂盒(博士德)，小量柱离心式组织总RNA提取纯化试剂盒(华舜)；PremixTaqR TaqTMVersion(宝生物)；Wizard〗〗(#A7170)纯化试剂盒(Promega)；一步法RT-PCR试剂盒(Promega)。
1.2方法
1.2.1模型制备与分组 实验分为模型组和正常对照组，每组20只。0.1 mol/L的柠檬酸盐缓冲液(pH4.0)配制成0.5%的STZ溶液；大鼠禁食不禁水12 h，称重；将STZ用0.1 mol/L的柠檬酸盐缓冲液(pH4.0)配制成0.5%的STZ溶液；糖尿病组大鼠一次性腹腔注射65 mg/Kg STZ，制备糖尿病大鼠模型。正常对照组一次性腹腔注射等量柠檬酸盐缓冲液。给药1 w后，采尾部静脉血测定血糖浓度，血糖浓度高于350 mg/dl大鼠确定为造模成功。所有大鼠均单笼饲养，自由进食和饮水，于饲养6 w后处死用于实验。
1.2.2免疫组织化学法观察Bcl-2与Bax蛋白 采用S-P法检测两组实验大鼠为平滑肌Bcl-2与Bax的表达情况。双盲法选取实验用每张切片不同部位随机观察五个400倍视野，分别记录显色程度和显色范围。显色程度分弱+、中++、强+++表示。显色范围分：显色范围占高倍视野<1/4为+，占1/4～2/4为++，占2/4～3/4为+++，>3/4为++++。然后将每个高倍视野显色程度和范围换算成“显色指数”。显色指数=显色程度×显色范围(+，++，+++，++++分别按1，2，3，4分计算)。取均数为每一种类蛋白表达的最终显色指数。, http://www.100md.com(张闻达)
关键词：糖尿病；胃轻瘫；Bcl-2；Bax；表达
中图分类号：R587.1 文献标识码：A 文章编号：1006-1959(2017)13-0083-02
Abstract：Objective To observe the changes of Bcl-2 and Bax in gastric smooth muscle cells of diabetic gastroparesis rats，and to explore the significance of Bcl-2 and Bax in the pathogenesis of diabetic gastroparesis.Methods 20 adult SD rats， streptozotocin(STZ)induced by preparation of diabetic rat model，another 20 rats as normal control group，feeding 6 w were obtained by the expression of gastric tissue.Immunohistochemical staining of Bcl-2 and Bax in gastric smooth muscle tissue.Results The normal control group Bcl-2 color index(5.68±3.24)；diabetes mellitus group Bcl-2 color index(1.58±0.72)；there was significant difference between the two groups，P<0.01.But Bax in the normal control group the color index(1.74±0.75)；In diabetic group，the color rendering index(5.75±2.12)was significantly different between the two groups.P<0.01.Conclusion Bcl-2 and Bax expression may play an important role in the development of diabetic gastroparesis.
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Key words：Diabetes mellitus；Gastroparesis；Bcl-2；Bax；Expression
胃轻瘫是糖尿病常见的慢性并发症之一，主要表现为胃动力低下、胃排空延迟、胃转运时间延长等引起的腹胀、恶心、呕吐等。至今糖尿病所致胃轻瘫的机理仍不完全清楚[1]。Bcl-2与Bax共属于一个家族，通过控制线粒体膜的通透性来调节凋亡激活物。bax二聚体在膜上打开通道，增加通透性；bcl-2與bax形成异聚体，降低通透性。所以，bcl-2水平的升高和bax的降低表明细胞对凋亡的抵抗性增强，应该是保护药物起作用的标志；而反之则相反。研究发现，糖尿病大鼠成模6 w后出现胃轻瘫机体症状，并发生胃平滑肌细胞凋亡[2]。为探讨Bcl-2与Bax在糖尿病胃轻瘫中的变化及作用，本实验以糖尿病胃轻瘫模型大鼠为研究对象，观察了胃平滑肌细胞的Bcl-2与Bax蛋白与基因的表达，旨在进一步阐明糖尿病胃轻瘫的发生机制，为临床探索新的治疗方案提供科学的理论依据与实验依据。
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1 材料与方法
1 材料与试剂
成年SD雄性大鼠40只，雌雄不限，体重200～220 g，由延边大学实验动物中心提供。链脲佐菌素(STZ)(SIGMA)，Bcl-2、Bax抗体(Cell Signaling)，即用型SABC免疫组化试剂盒(博士德)，小量柱离心式组织总RNA提取纯化试剂盒(华舜)；PremixTaqR TaqTMVersion(宝生物)；Wizard〗〗(#A7170)纯化试剂盒(Promega)；一步法RT-PCR试剂盒(Promega)。
1.2方法
1.2.1模型制备与分组 实验分为模型组和正常对照组，每组20只。0.1 mol/L的柠檬酸盐缓冲液(pH4.0)配制成0.5%的STZ溶液；大鼠禁食不禁水12 h，称重；将STZ用0.1 mol/L的柠檬酸盐缓冲液(pH4.0)配制成0.5%的STZ溶液；糖尿病组大鼠一次性腹腔注射65 mg/Kg STZ，制备糖尿病大鼠模型。正常对照组一次性腹腔注射等量柠檬酸盐缓冲液。给药1 w后，采尾部静脉血测定血糖浓度，血糖浓度高于350 mg/dl大鼠确定为造模成功。所有大鼠均单笼饲养，自由进食和饮水，于饲养6 w后处死用于实验。
1.2.2免疫组织化学法观察Bcl-2与Bax蛋白 采用S-P法检测两组实验大鼠为平滑肌Bcl-2与Bax的表达情况。双盲法选取实验用每张切片不同部位随机观察五个400倍视野，分别记录显色程度和显色范围。显色程度分弱+、中++、强+++表示。显色范围分：显色范围占高倍视野<1/4为+，占1/4～2/4为++，占2/4～3/4为+++，>3/4为++++。然后将每个高倍视野显色程度和范围换算成“显色指数”。显色指数=显色程度×显色范围(+，++，+++，++++分别按1，2，3，4分计算)。取均数为每一种类蛋白表达的最终显色指数。, http://www.100md.com(张闻达)
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