酶消化法最常用的消化酶有胶原酶，胰酶和中性蛋白酶(Dispase)，这些酶既有单独使用，又有联合使用：①胶原酶：培养阴道上皮细胞常用的胶原酶包括Ⅰ型胶原酶、Ⅱ型胶原酶和Ⅳ型胶原酶。胶原酶的消化作用针对性较强，Ⅰ型型胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损。故胶原酶应与其他酶联合消化细胞，不宜单独使用。②胰酶：胰酶可分解细胞膜表面蛋白质，增加细胞通透性，而且细胞粘附相关的蛋白质也可能被消化，从而达到分离效果，获得单个细胞或细胞团。但若消化时间过长容易造成细胞损伤。对此，刘方方[5]将胰酶消化方法改进为3步消化法，加0.25%胰酶，37 ℃消化10 min，吸管吹打，吸出的悬液用含10% FBS的DMEM/F12 终止消化，剩余组织再加0.25%胰酶消化，重复3次。结果该法获得的细胞数高于一步消化法(直接消化20～30 min)，但无显著性差异。在首次换液时贴壁细胞数三步法高于一步法，有显著性差异，结果提示减少酶对细胞的消化作用时间，可以保持细胞的完整性和活性。因此，采用胰酶短时间多次消化终止的方法，可以避免胰酶对细胞的过度消化，从而降低对细胞的损伤 ......