1 材料与方法

    1.1实验材料

    实验所用SPF大鼠均由安徽医科大学动物实验中心提供，4 w雌性大鼠5只，SPF级，重(100 ±10)g；新生大鼠5只，SPF级；成年雌性大鼠48只，SPF级，重(230±20)g。主要试剂与仪器：胎牛血清FBS(美国Gibco公司)；慢病毒载体(上海吉凯基因公司)；B-27(美国Invitrogen公司)；CO2恒温培养箱(日本三洋)。

    1.2实验方法

    1.2.1 大鼠NSCs的培养、转染、鉴定 新生SPF级大鼠腹腔麻醉(10%水合氯醛)，剪刀离断头颅，75%酒精浸泡5 min，紫外线照射30 min，取大鼠全脑，Hank's液漂洗三次，剪碎全脑，加入神经元基础培养基5 ml，加入胰酶细胞消化液1 ml，消化5 min，加入10%胎牛血清培养基终止消化；70 μm孔径的筛网过滤，制成单细胞悬液，1000 r/min离心10 min，弃上清液， 反复吹打单细胞悬液，加入2 ml无血清培养基 (含有 DMEM/F-12 + 2 %B-27 + 20 ng/mlEGF + 20 ng/mlbFGF + 青霉素100 U/ml + 链霉素0.1 mg/ml) ......