泛耐药鲍曼不动杆菌β—内酰胺类抗菌药物耐药机制研究(2)
1.4 基因检测
20株XDRAB耐药元件检测项目：32种β-内酰胺酶编码基因(blaTEM、blaSHV、blaKPC、blaCTX-M-1群、blaCTX-M-2群、blaCTX-M-8群、blaCTX-M-9群、blaCTX-M-25群、blaPER、blaVEB、blaGES、blaCARB、 blaRTG、blaIMP、blaVIM、blaDIM、blaSIM、blaSPM、blaGIM、blaAIM、blaNDM、blaKHM、blaTMB、blaDHA、 blaOXA-1群、blaOXA-2群、blaOXA-10群、blaOXA-20群、blaOXA-23群、blaOXA-24群、blaOXA-51群、 blaOXA-58群)、1种膜孔蛋白carO编码基因以及获得性外排泵泵蛋白adeB编码基因，检测均为PCR法。基因引物识别序列和目的产物长度，见表1。上述参数、靶基因全部PCR引物序列由无锡新区虎马生物信息学工作室设计并获授权使用，商品化基因检测试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供。
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1.5 样本聚类分析
测得结果作样本聚类分析(UPGMA法)。样本聚类分析由无锡新区虎马生物信息学工作室完成
2结果
2.1基因检测结果
20株XDRAB经32种β-内酰胺酶基因检测，均检出A类β-内酰胺酶基因TEM、C类β-内酰胺酶基因ADC、D类β-内酰胺酶基因OXA-23，OXA-51，即TEM、ADC、OXA-23，OXA-51阳性率均为100.00%，B类β-内酰胺酶基因未检出。20株XDRAB膜孔蛋白carO基因缺失率100.00%，檢出外排泵adeB基因，阳性率为95.00%，见表2。
2.2 阳性耐药基因电泳图
阳性耐药基因(TEM、OXA-23、carO、ADC、adeB、OXA-51)PCR电泳图，见图1。
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2.3 耐药元件样本聚类分析
A-黄石市中心医院，A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20代表20株细菌，见图2。
3讨论
我院临床分离的20株泛耐药鲍氏不动杆菌中，12株来源于重症监护病房，8株来源于神经外科病房，这可能与多种因素相关：如各种侵入性操作如气管插管、导尿管的使用；导管留置时间延迟；患者免疫功能低下；细菌变异；抗菌药物不合理使用等，应引起临床医护人员高度重视，避免暴发性医院感染的发生。
导致革兰阴性杆菌β-内酰胺类抗菌药物耐药的机制主要有：①产β-内酰胺酶，并释放到革兰阴性杆菌周质空间，灭活经外膜膜孔流入的β-内酰胺类药物，β-内酰胺酶按酶蛋白序列聚类可分为A、B、C、D4类。②革兰阴性杆菌外膜膜孔蛋白缺陷，导致β-内酰胺类抗菌药物进入减少或无法进入。③革兰阴性杆菌内膜上的外排泵蛋白编码基因突变，导致外排β-内酰胺类药物能力増强或额外获得外排泵。④青霉素结合蛋白各种亚单位编码基因突变，突变导致PBPs构象改变，β-内酰胺类药物与构象改变的PBPs结合力下降而耐药。尽管国内对耐β-内酰胺类抗菌药物鲍氏不动杆菌已有较多β-内酰胺酶基因检测报道，但同时涉及膜孔蛋白carO基因和外排泵adeB基因的报道较为少见[6-8]。
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本研究20株XDRAB检出TEM、ADC、OXA-23、OXA-51阳性率均为100.00%。B类金属β-内酰胺酶基因未检出。本研究作了10种B类β-内酰胺酶基因检测，包括新型金属β-内酰胺酶AIM、KHM、TMB、IMP、VIM等均为阴性。carO基因编码鲍氏不动杆菌碳青霉烯类药物特异性膜孔蛋白carO[9-11]。本组20株XDRAB膜孔蛋白carO基因缺失率达100.00%， 阳性耐药基因PCR电泳图。
细菌的外排泵系统可分为5大类：耐受-生节-分裂家族(RND)、多药物与毒物外排家族(MATE)、药物与代谢物转运体超家族(DMT)及与之相关的小多药外排家族(SMR)、ATP结合转运体家族(ABC)，除ABC为能量泵外，其余均为质子泵[12-13]。adeABC外排泵系统外排β-内酰胺类药物、氨基糖苷类药物、红霉素、氯霉素、四环素[14-16]。adeB基因为ade ABC外排泵泵蛋白的编码基因。由实验可见，本组PDRAB对头孢类药物(包括碳青霉烯类药物)均耐药，与产TEM、ADC、OXA-23、OXA-51β-内酰胺酶，膜孔蛋白carO基因缺失和获得ade B 外排泵3耐药机制相关。
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本研究分离菌株耐药元件检测结果的样本聚类分析可见， A院20株XDRAB分不同的簇群，由二个克隆传播，A院的A1- A2-A3-A4-A5-A6-A7-A9-A12-A14-A15-A16-A17-A19-A20等15株为同一克隆，构成大暴发，A8-A11-A18等3株亦为同一克隆。本研究提示，XDRAB应引起足够的关注，它们携带的获得性耐药基因可能会加剧其它革兰阴性杆菌的耐药性，因此加强医院感染控制的措施是必须的。
参考文献：
[1]Kim Y，Bae IK，Jeong SH，et al.In Vivo Selection of Pan-Drug Resistant Acinetobacter baumannii during Antibiotic Treatment[J].Yonsei Med J，2014，56(4)：928-934.
[2]Ning F，Shen Y，Chen X，et al.A combination regimen of meropenem，cefoperazone-sulbactam and minocycline for extensive burns with pan-drug resistant Acinetobacter baumannii infection[J].Chin Med J(Engl)，2014，127(6)：1177-1179., 百拇医药(鲍群丽 汪宏良 柯俊)
20株XDRAB耐药元件检测项目：32种β-内酰胺酶编码基因(blaTEM、blaSHV、blaKPC、blaCTX-M-1群、blaCTX-M-2群、blaCTX-M-8群、blaCTX-M-9群、blaCTX-M-25群、blaPER、blaVEB、blaGES、blaCARB、 blaRTG、blaIMP、blaVIM、blaDIM、blaSIM、blaSPM、blaGIM、blaAIM、blaNDM、blaKHM、blaTMB、blaDHA、 blaOXA-1群、blaOXA-2群、blaOXA-10群、blaOXA-20群、blaOXA-23群、blaOXA-24群、blaOXA-51群、 blaOXA-58群)、1种膜孔蛋白carO编码基因以及获得性外排泵泵蛋白adeB编码基因，检测均为PCR法。基因引物识别序列和目的产物长度，见表1。上述参数、靶基因全部PCR引物序列由无锡新区虎马生物信息学工作室设计并获授权使用，商品化基因检测试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供。
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1.5 样本聚类分析
测得结果作样本聚类分析(UPGMA法)。样本聚类分析由无锡新区虎马生物信息学工作室完成
2结果
2.1基因检测结果
20株XDRAB经32种β-内酰胺酶基因检测，均检出A类β-内酰胺酶基因TEM、C类β-内酰胺酶基因ADC、D类β-内酰胺酶基因OXA-23，OXA-51，即TEM、ADC、OXA-23，OXA-51阳性率均为100.00%，B类β-内酰胺酶基因未检出。20株XDRAB膜孔蛋白carO基因缺失率100.00%，檢出外排泵adeB基因，阳性率为95.00%，见表2。
2.2 阳性耐药基因电泳图
阳性耐药基因(TEM、OXA-23、carO、ADC、adeB、OXA-51)PCR电泳图，见图1。
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2.3 耐药元件样本聚类分析
A-黄石市中心医院，A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20代表20株细菌，见图2。
3讨论
我院临床分离的20株泛耐药鲍氏不动杆菌中，12株来源于重症监护病房，8株来源于神经外科病房，这可能与多种因素相关：如各种侵入性操作如气管插管、导尿管的使用；导管留置时间延迟；患者免疫功能低下；细菌变异；抗菌药物不合理使用等，应引起临床医护人员高度重视，避免暴发性医院感染的发生。
导致革兰阴性杆菌β-内酰胺类抗菌药物耐药的机制主要有：①产β-内酰胺酶，并释放到革兰阴性杆菌周质空间，灭活经外膜膜孔流入的β-内酰胺类药物，β-内酰胺酶按酶蛋白序列聚类可分为A、B、C、D4类。②革兰阴性杆菌外膜膜孔蛋白缺陷，导致β-内酰胺类抗菌药物进入减少或无法进入。③革兰阴性杆菌内膜上的外排泵蛋白编码基因突变，导致外排β-内酰胺类药物能力増强或额外获得外排泵。④青霉素结合蛋白各种亚单位编码基因突变，突变导致PBPs构象改变，β-内酰胺类药物与构象改变的PBPs结合力下降而耐药。尽管国内对耐β-内酰胺类抗菌药物鲍氏不动杆菌已有较多β-内酰胺酶基因检测报道，但同时涉及膜孔蛋白carO基因和外排泵adeB基因的报道较为少见[6-8]。
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本研究20株XDRAB检出TEM、ADC、OXA-23、OXA-51阳性率均为100.00%。B类金属β-内酰胺酶基因未检出。本研究作了10种B类β-内酰胺酶基因检测，包括新型金属β-内酰胺酶AIM、KHM、TMB、IMP、VIM等均为阴性。carO基因编码鲍氏不动杆菌碳青霉烯类药物特异性膜孔蛋白carO[9-11]。本组20株XDRAB膜孔蛋白carO基因缺失率达100.00%， 阳性耐药基因PCR电泳图。
细菌的外排泵系统可分为5大类：耐受-生节-分裂家族(RND)、多药物与毒物外排家族(MATE)、药物与代谢物转运体超家族(DMT)及与之相关的小多药外排家族(SMR)、ATP结合转运体家族(ABC)，除ABC为能量泵外，其余均为质子泵[12-13]。adeABC外排泵系统外排β-内酰胺类药物、氨基糖苷类药物、红霉素、氯霉素、四环素[14-16]。adeB基因为ade ABC外排泵泵蛋白的编码基因。由实验可见，本组PDRAB对头孢类药物(包括碳青霉烯类药物)均耐药，与产TEM、ADC、OXA-23、OXA-51β-内酰胺酶，膜孔蛋白carO基因缺失和获得ade B 外排泵3耐药机制相关。
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本研究分离菌株耐药元件检测结果的样本聚类分析可见， A院20株XDRAB分不同的簇群，由二个克隆传播，A院的A1- A2-A3-A4-A5-A6-A7-A9-A12-A14-A15-A16-A17-A19-A20等15株为同一克隆，构成大暴发，A8-A11-A18等3株亦为同一克隆。本研究提示，XDRAB应引起足够的关注，它们携带的获得性耐药基因可能会加剧其它革兰阴性杆菌的耐药性，因此加强医院感染控制的措施是必须的。
参考文献：
[1]Kim Y，Bae IK，Jeong SH，et al.In Vivo Selection of Pan-Drug Resistant Acinetobacter baumannii during Antibiotic Treatment[J].Yonsei Med J，2014，56(4)：928-934.
[2]Ning F，Shen Y，Chen X，et al.A combination regimen of meropenem，cefoperazone-sulbactam and minocycline for extensive burns with pan-drug resistant Acinetobacter baumannii infection[J].Chin Med J(Engl)，2014，127(6)：1177-1179., 百拇医药(鲍群丽 汪宏良 柯俊)