肾康注射液细菌内毒素检查法的研究(2)
1.3.4干扰试验预实验 用BET水将7批肾康注射液分别制成原液、2、4、6、8、12倍的系列溶液，记为供试品阴性对照(NPC)系列；制备相同倍数的供试品系列溶液，使每个溶液中都含有2 λ的内毒素，记为供试品阳性对照(PPC)系列；同时设立阳性对照(PC)管和阴性对照(NC)管。
1.3.5正式干扰试验 根据预实验结果，选择相应稀释度溶液进行正式干扰试验。以该溶液及BET水将内毒素标准品稀释成2λ、λ、0.5λ、0.25λ的系列溶液，分别取0.1 ml加至已复溶的鲎试剂管内，每一浓度平行4支，另设2支阴性对照。
1.3.6供试品细菌内毒素检查 取7批肾康注射液，以其不干扰稀释溶液，用两个厂家TAL进行细菌内毒素检查，每1 ml肾康注射液中含细菌内毒素的量不得过3 Eu。
2 结果
2.1鲎试剂灵敏度复核 两批鲎试剂灵敏度测定值(λc)均在0.5 λ～2 λ之间，结果符合规定，见表1。
, 百拇医药
2.2干扰试验预实验 7批肾康注射液稀释到4倍时，可排除干扰，见表2～表3。
2.3正式干扰试验 Et/Es值均在0.5～2.0之间(Es和Et分别表示细菌内毒素标准品的BET水溶液和细菌内毒素标准品的供试品溶液反应终点浓度的几何平均值)，根据《中国药典》的评判标准，肾康注射液4倍稀释液无干扰作用，说明使用鲎试剂法进行内毒素检查是可行的，见表4。
2.4供试品细菌内毒素检查 以肾康注射液的4倍稀释溶液，用两个厂家TAL进行细菌内毒素检查，结果均符合规定，见表5。
3讨论
热原是指能造成恒温动物体温异常升高的物质，有外源性和内源性之分。细菌内毒素是革兰阴性菌细胞壁上的一种脂多糖和微量蛋白的复合物，属外源性致热原。通常来讲，内毒素是热原，但热原不全是内毒素。严格来讲，并非每种热原都具有脂多糖结构，但所有已知的内毒素脂多糖都有热原活性。因此，在GMP环境中形成一个共识--不存在细菌内毒素即不存在热原。家兔法是通过静脉注入家兔体内一剂量的供试品，在规定时间内测其体温变化，从而判定供试品的热原限度是否符合规定。我国于五十年代将此法载入药典，而在六十年代末发明了鲎试剂法，即利用鲎试剂来检测或量化内毒素。鲎试剂法相比于家兔法，具有快捷、高灵敏度、操作简便易重现等优点，受到了现代药检的青睐。
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肾康注射液属二类新药，主要成分有黄芪、大黄、丹参、红花。君药为黄芪，臣药为大黄，黄芪健脾升清，大黄通腑降浊，一升一降，二者相辅，从而化瘀祛浊。丹参、红花活血止痛，共为佐使[9]。肾康注射液在临床实践中表现出广泛的预防肾损伤，保护肾功能的作用[10]，尤其在治疗糖尿病肾病、慢性肾功能衰竭、老年慢性肾病方面功效卓著[11-13]。但是，肾康注射液成分复杂，容易造成一些不良反应的发生，热原反应较为常见[2-3，14]。因此，对这类疗效确切、应用广泛的中药注射液加强热原检查很有必要，这对保障临床用药安全，严格质量标准意义深远。
本文对肾康注射液进行了细菌内毒素干扰试验，结果表明，其4倍稀释液对鲎试剂与内毒素的反应无干扰作用，证实可建立鲎试剂法以替代家兔法控制热原，并且本文将其限值从文献[4]的4 Eu/ml提高到3 Eu/ml，严格了质量标准。为保证結果的可靠性，本文选取了两个不同厂家的鲎试剂，消除了鲎试剂可能的反应差异，并对7批肾康注射液进行了研究，增加了试验的可信度。因此，本试验为该品种在新版的国家标准中将家兔法修订为细菌内毒素检查法提供了科学依据。
, 百拇医药
参考文献：
[1]刘蔚红，高永丽，宋晓红.肾康注射液不良反应文献综述[J].中国药物滥用防治杂志，2016，22(2)：113-114.
[2]梁学芹.肾康注射液致热原反应1例案例分析[J].北方药学，2014，11(4)：149.
[3]刘宏韵.中药注射剂不良反应的特点与临床合理应用分析[J].河北医药，2013，35(1)：135-136.
[4]吴寒寅，孟德胜.肾康注射液细菌内毒素检查法的建立[J].中国药业，2011，20(8)：38-39.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2015年版四部通则[S].北京：中国医药科技出版社，2015：154-157.
, http://www.100md.com [6]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[S].北京：中国医药科技出版社，2010：310-325.
[7]周继春.甲磺酸帕珠沙星注射液细菌内毒素检查法建立[J].医药论坛杂志，2015，36(10)：48-52.
[8]张横，蔡彤，高华.盐酸莫西沙星注射液细菌内毒素检查方法学研究[J].中国药事，2014，28(12)：1298-1302.
[9]何玉华，李明权，赵良斌，等.肾康注射液联合血液透析对慢性肾功能衰竭透析次数、营养状况的临床观察[J].世界科学技术-中医药现代化，2013，15(4)：746-752.
[10]楚加元.肾康注射液药理及临床研究进展综述[J].现代中药研究与实践，2014，28(2)：76-78.
[11]蒋志伟，吕延英，夏结来，等.肾康注射液治疗慢性肾功能衰竭的Ⅳ期临床观察研究[J].中国医科大学学报，2011，40(10)：941-945.
, 百拇医药
[12]张研，王清，姜晓丹，等.肾康注射液治疗老年糖尿病肾病患者50例[J].中国老年学杂志，2013，33(10)：2353-2355.
[13]胡斯明，钱志远，施晓松，等.前列地尔联合肾康注射液治疗老年慢性肾脏病的临床疗效[J].中国老年学杂志，2015，35(22)：6533-6535.
[14]刘群.29例肾康注射液不良反应/事件分析[J].药物流行病学杂志，2012(10)：482-484.
收稿日期：2017-6-22；修回日期：2017-7-10
编辑/李桦, 百拇医药(李晓春 王莉芳 徐长根)
1.3.5正式干扰试验 根据预实验结果，选择相应稀释度溶液进行正式干扰试验。以该溶液及BET水将内毒素标准品稀释成2λ、λ、0.5λ、0.25λ的系列溶液，分别取0.1 ml加至已复溶的鲎试剂管内，每一浓度平行4支，另设2支阴性对照。
1.3.6供试品细菌内毒素检查 取7批肾康注射液，以其不干扰稀释溶液，用两个厂家TAL进行细菌内毒素检查，每1 ml肾康注射液中含细菌内毒素的量不得过3 Eu。
2 结果
2.1鲎试剂灵敏度复核 两批鲎试剂灵敏度测定值(λc)均在0.5 λ～2 λ之间，结果符合规定，见表1。
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2.2干扰试验预实验 7批肾康注射液稀释到4倍时，可排除干扰，见表2～表3。
2.3正式干扰试验 Et/Es值均在0.5～2.0之间(Es和Et分别表示细菌内毒素标准品的BET水溶液和细菌内毒素标准品的供试品溶液反应终点浓度的几何平均值)，根据《中国药典》的评判标准，肾康注射液4倍稀释液无干扰作用，说明使用鲎试剂法进行内毒素检查是可行的，见表4。
2.4供试品细菌内毒素检查 以肾康注射液的4倍稀释溶液，用两个厂家TAL进行细菌内毒素检查，结果均符合规定，见表5。
3讨论
热原是指能造成恒温动物体温异常升高的物质，有外源性和内源性之分。细菌内毒素是革兰阴性菌细胞壁上的一种脂多糖和微量蛋白的复合物，属外源性致热原。通常来讲，内毒素是热原，但热原不全是内毒素。严格来讲，并非每种热原都具有脂多糖结构，但所有已知的内毒素脂多糖都有热原活性。因此，在GMP环境中形成一个共识--不存在细菌内毒素即不存在热原。家兔法是通过静脉注入家兔体内一剂量的供试品，在规定时间内测其体温变化，从而判定供试品的热原限度是否符合规定。我国于五十年代将此法载入药典，而在六十年代末发明了鲎试剂法，即利用鲎试剂来检测或量化内毒素。鲎试剂法相比于家兔法，具有快捷、高灵敏度、操作简便易重现等优点，受到了现代药检的青睐。
, 百拇医药
肾康注射液属二类新药，主要成分有黄芪、大黄、丹参、红花。君药为黄芪，臣药为大黄，黄芪健脾升清，大黄通腑降浊，一升一降，二者相辅，从而化瘀祛浊。丹参、红花活血止痛，共为佐使[9]。肾康注射液在临床实践中表现出广泛的预防肾损伤，保护肾功能的作用[10]，尤其在治疗糖尿病肾病、慢性肾功能衰竭、老年慢性肾病方面功效卓著[11-13]。但是，肾康注射液成分复杂，容易造成一些不良反应的发生，热原反应较为常见[2-3，14]。因此，对这类疗效确切、应用广泛的中药注射液加强热原检查很有必要，这对保障临床用药安全，严格质量标准意义深远。
本文对肾康注射液进行了细菌内毒素干扰试验，结果表明，其4倍稀释液对鲎试剂与内毒素的反应无干扰作用，证实可建立鲎试剂法以替代家兔法控制热原，并且本文将其限值从文献[4]的4 Eu/ml提高到3 Eu/ml，严格了质量标准。为保证結果的可靠性，本文选取了两个不同厂家的鲎试剂，消除了鲎试剂可能的反应差异，并对7批肾康注射液进行了研究，增加了试验的可信度。因此，本试验为该品种在新版的国家标准中将家兔法修订为细菌内毒素检查法提供了科学依据。
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参考文献：
[1]刘蔚红，高永丽，宋晓红.肾康注射液不良反应文献综述[J].中国药物滥用防治杂志，2016，22(2)：113-114.
[2]梁学芹.肾康注射液致热原反应1例案例分析[J].北方药学，2014，11(4)：149.
[3]刘宏韵.中药注射剂不良反应的特点与临床合理应用分析[J].河北医药，2013，35(1)：135-136.
[4]吴寒寅，孟德胜.肾康注射液细菌内毒素检查法的建立[J].中国药业，2011，20(8)：38-39.
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, http://www.100md.com [6]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[S].北京：中国医药科技出版社，2010：310-325.
[7]周继春.甲磺酸帕珠沙星注射液细菌内毒素检查法建立[J].医药论坛杂志，2015，36(10)：48-52.
[8]张横，蔡彤，高华.盐酸莫西沙星注射液细菌内毒素检查方法学研究[J].中国药事，2014，28(12)：1298-1302.
[9]何玉华，李明权，赵良斌，等.肾康注射液联合血液透析对慢性肾功能衰竭透析次数、营养状况的临床观察[J].世界科学技术-中医药现代化，2013，15(4)：746-752.
[10]楚加元.肾康注射液药理及临床研究进展综述[J].现代中药研究与实践，2014，28(2)：76-78.
[11]蒋志伟，吕延英，夏结来，等.肾康注射液治疗慢性肾功能衰竭的Ⅳ期临床观察研究[J].中国医科大学学报，2011，40(10)：941-945.
, 百拇医药
[12]张研，王清，姜晓丹，等.肾康注射液治疗老年糖尿病肾病患者50例[J].中国老年学杂志，2013，33(10)：2353-2355.
[13]胡斯明，钱志远，施晓松，等.前列地尔联合肾康注射液治疗老年慢性肾脏病的临床疗效[J].中国老年学杂志，2015，35(22)：6533-6535.
[14]刘群.29例肾康注射液不良反应/事件分析[J].药物流行病学杂志，2012(10)：482-484.
收稿日期：2017-6-22；修回日期：2017-7-10
编辑/李桦, 百拇医药(李晓春 王莉芳 徐长根)