肾康注射液细菌内毒素检查法的研究(1)
摘 要：目的 建立肾康注射液细菌内毒素检查方法，以期能够替代家兔热原法控制产品的热原，达到快速、高效、可靠、简便的目的。方法 按《中国药典2015年版四部》通则1143细菌内毒素检查法进行试验。采用两个不同厂家的的鲎试剂，对7个不同批次的样品开展干扰试验，确定最小不干扰稀释倍数，并对样品进行了细菌内毒素检查。结果 供试品4倍稀释液无干扰作用，细菌内毒素限值定为1.0 Eu/ml。结论 用细菌内毒素检查法代替热原法是可行的。
关键词：肾康注射液；细菌内毒素；鲎试剂；干扰试验
中图分类号：R927 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.025
文章编号：1006-1959(2018)01-0070-04
Study on Bacterial Endotoxin Test of Shenkang Injection
, http://www.100md.com
LI Xiao-chun，WANG Li-fang，XU Chang-gen
(Shaanxi Province Food and Drug Inspection Institute，Xi'an 710065，Shaanxi，China)
Abstract：Objective To establish a bacterial endotoxin test for Shenkang injection in order to replace the pyrogen of rabbits' pyrogen control system and achieve the goal of rapid，high efficiency，reliability and simplicity.Methods According to the"Chinese Pharmacopoeia 2015 edition four"general rule 1143 bacterial endotoxin test method for testing.Tropsch reagents from two different manufacturers were used to perform interference tests on 7 different batches of samples to determine the smallest non-interfering dilution and bacterial endotoxin testing of the samples.Results 4-fold dilution of the test sample without interference，bacterial endotoxin limits set at 1.0 Eu/ml.Conclusion Bacterial endotoxin test instead of pyrogen method is feasible.
, http://www.100md.com
Key words：Shenkang injection；Bacterial endotoxin；Tropsch reagent；Interference test
腎康注射液为黄棕色澄明液体，可降逆泄浊、益气活血、通腑利湿，适用于慢性肾功能衰竭属湿浊血瘀证[1-4]。《中国药典2015年版四部》通则9301注射剂安全性检查法应用指导原则中明确指出静脉用注射剂均应设细菌内毒素或热原检查项。目前，肾康注射液现有质量标准SFDA标准(试行)YBZ08522004中是用家兔法控制热原的，家兔法存在试验条件要求高、操作繁琐、影响因素多、动物个体差异大等缺点，而细菌内毒素检查法具有快速灵敏、重现性好、简便易行等优点[5-8]。因此对于肾康注射液更倾向于采用细菌内毒素检查法。基于此，本文通过实验探讨细菌内毒素检查法应用于肾康注射液的可行性，为提高该产品的质量控制提供一定的参考依据。
1材料与方法
, http://www.100md.com 1.1材料 肾康注射液(规格20ml/支，批号2016010 32、201601031、201601033、201603021、201604022、01603013、201604031)；细菌内毒素工作标准品(WSE，规格80 Eu/支，批号150601-201580，中国食品药品检定研究院)；BET水(规格5 ml/支，批号160006-201401，中国食品药品检定研究院)；鲎试剂TAL[批号1507180，湛江博康海洋生物有限公司(简称博康海洋)；批号1507202，湛江安度斯生物有限公司(简称安度斯)；规格及灵敏度分别为0.1 ml、0.25 Eu/ml]。
1.2仪器选取 DHG-9245A电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；ZH-2自动涡旋混合器(天津药典标准仪器厂)。
1.3方法
1.3.1鲎试剂灵敏度(λ)复核 按《中国药典2015年版四部》通则1143细菌内毒素检查法项下规定，用BET水将内毒素工作标准品制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的标准溶液。取已复溶的鲎试剂18支，其中16支分别加入0.1 ml上述不同浓度的标准溶液，每一浓度平行4支，另外2支加入0.1 mlBET水作阴性对照。
1.3.2细菌内毒素限值(L)的确定 《中国药典》规定L=K/M，注射剂K=5 Eu/(kg·h)，M为人用kg·h最大供试品量，参照肾康注射液用法用量，本品为静脉滴注，1次/d 100 ml，使用10%葡萄糖液300 ml稀释，按30滴/min计算，体重按60 kg计算，则L = 3.33 Eu/ml，最终将限值定为3 Eu/ml。
1.3.3供试品最大有效稀释倍数(MVD)的确定 《中国药典》规定供试品最大稀释倍数MVD=CL/λ，国内市售鲎试剂的λ常为0.5、0.25、0.125、0.06、0.03 Eu/ml，则对应的供试品的MVD分别为6、12、24、48、96倍。, http://www.100md.com(李晓春 王莉芳 徐长根)
关键词：肾康注射液；细菌内毒素；鲎试剂；干扰试验
中图分类号：R927 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.025
文章编号：1006-1959(2018)01-0070-04
Study on Bacterial Endotoxin Test of Shenkang Injection
, http://www.100md.com
LI Xiao-chun，WANG Li-fang，XU Chang-gen
(Shaanxi Province Food and Drug Inspection Institute，Xi'an 710065，Shaanxi，China)
Abstract：Objective To establish a bacterial endotoxin test for Shenkang injection in order to replace the pyrogen of rabbits' pyrogen control system and achieve the goal of rapid，high efficiency，reliability and simplicity.Methods According to the"Chinese Pharmacopoeia 2015 edition four"general rule 1143 bacterial endotoxin test method for testing.Tropsch reagents from two different manufacturers were used to perform interference tests on 7 different batches of samples to determine the smallest non-interfering dilution and bacterial endotoxin testing of the samples.Results 4-fold dilution of the test sample without interference，bacterial endotoxin limits set at 1.0 Eu/ml.Conclusion Bacterial endotoxin test instead of pyrogen method is feasible.
, http://www.100md.com
Key words：Shenkang injection；Bacterial endotoxin；Tropsch reagent；Interference test
腎康注射液为黄棕色澄明液体，可降逆泄浊、益气活血、通腑利湿，适用于慢性肾功能衰竭属湿浊血瘀证[1-4]。《中国药典2015年版四部》通则9301注射剂安全性检查法应用指导原则中明确指出静脉用注射剂均应设细菌内毒素或热原检查项。目前，肾康注射液现有质量标准SFDA标准(试行)YBZ08522004中是用家兔法控制热原的，家兔法存在试验条件要求高、操作繁琐、影响因素多、动物个体差异大等缺点，而细菌内毒素检查法具有快速灵敏、重现性好、简便易行等优点[5-8]。因此对于肾康注射液更倾向于采用细菌内毒素检查法。基于此，本文通过实验探讨细菌内毒素检查法应用于肾康注射液的可行性，为提高该产品的质量控制提供一定的参考依据。
1材料与方法
, http://www.100md.com 1.1材料 肾康注射液(规格20ml/支，批号2016010 32、201601031、201601033、201603021、201604022、01603013、201604031)；细菌内毒素工作标准品(WSE，规格80 Eu/支，批号150601-201580，中国食品药品检定研究院)；BET水(规格5 ml/支，批号160006-201401，中国食品药品检定研究院)；鲎试剂TAL[批号1507180，湛江博康海洋生物有限公司(简称博康海洋)；批号1507202，湛江安度斯生物有限公司(简称安度斯)；规格及灵敏度分别为0.1 ml、0.25 Eu/ml]。
1.2仪器选取 DHG-9245A电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；ZH-2自动涡旋混合器(天津药典标准仪器厂)。
1.3方法
1.3.1鲎试剂灵敏度(λ)复核 按《中国药典2015年版四部》通则1143细菌内毒素检查法项下规定，用BET水将内毒素工作标准品制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的标准溶液。取已复溶的鲎试剂18支，其中16支分别加入0.1 ml上述不同浓度的标准溶液，每一浓度平行4支，另外2支加入0.1 mlBET水作阴性对照。
1.3.2细菌内毒素限值(L)的确定 《中国药典》规定L=K/M，注射剂K=5 Eu/(kg·h)，M为人用kg·h最大供试品量，参照肾康注射液用法用量，本品为静脉滴注，1次/d 100 ml，使用10%葡萄糖液300 ml稀释，按30滴/min计算，体重按60 kg计算，则L = 3.33 Eu/ml，最终将限值定为3 Eu/ml。
1.3.3供试品最大有效稀释倍数(MVD)的确定 《中国药典》规定供试品最大稀释倍数MVD=CL/λ，国内市售鲎试剂的λ常为0.5、0.25、0.125、0.06、0.03 Eu/ml，则对应的供试品的MVD分别为6、12、24、48、96倍。, http://www.100md.com(李晓春 王莉芳 徐长根)