Caspase—3在不同分期翼状胬肉上皮细胞中表达的研究(1)
摘 要：目的 探讨Caspase-3在不同临床分期的翼状胬肉中的表达和意义。方法 采用免疫组化Elibision法检测20例静止期翼状胬肉、20例活动期翼状胬肉、10例正常结膜中上皮细胞中Caspase-3的表达。结果 Caspase-3在翼状胬肉上皮细胞中为低表达，和正常对照组差异有统计学意义(P<0.05)，静止期和活动期翼状胬肉组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Caspase-3在翼状胬肉上皮细胞中为低表达，提示翼状胬肉的发生、发展有可能和上皮细胞凋亡和增殖异常有关。
关键词：Caspase-3；翼状胬肉；临床分期；免疫组织化学
中图分类号：R777.33 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.03.022
文章編号：1006-1959(2018)03-0071-02
, 百拇医药
Abstract：Objective To investigate the expression and significance of Caspase-3 in pterygium at different clinical stages.Methods 20 cases of quiescent pterygium and 20 cases of active pterygium were detected by immunohistochemical Elibision method. Expression of Caspase-3 in epithelial cells of 10 cases of normal conjunctiva.Results The expression of Caspase-3 was low in pterygium epithelial cells.There was significant difference between pterygium group and normal control group(P<0.05)，but there was no significant difference in pterygium between static and active stage(P>0.05).Conclusion The low expression of Caspase-3 in pterygium epithelial cells suggests that the occurrence and development of pterygium may be related to the abnormal apoptosis and proliferation of pterygium cells.
, http://www.100md.com
Key words：Caspase-3；Pterygium；Clinical staging；Immunohistochemistry
翼状胬肉(pterygium)是一种只发生在人类的常见眼表疾病，是临床上最为常见的眼科疾病之一[1]。研究表明，翼状胬肉的发生发展在一定程度上来说与肿瘤的病因——异常增生与凋亡的失衡有相近之处[2]，过度增殖和凋亡的减弱导致了结膜上皮细胞的增生和翼状胬肉的生长。我们应用免疫组织化学方法检测翼状胬肉组织中凋亡相关基因Caspases-3表达，旨在探讨凋亡基因产物在翼状胬肉发病机理中的作用。
1资料与方法
1.1一般资料 选择本院2015年1月～2017年6月住院的20例静止期翼状胬肉和20例活动期翼状胬肉患者的手术标本。本研究课题已经过医院伦理委员会审核。活动期为组织肥大并充血，血管增粗增大，头部区隆起，角膜有浸润；静止期为组织菲薄，无充血，无或存在少许纤维血管，头部平坦，角膜透明。对照组为10例正常结膜组织，采集于视网膜脱离、外伤等患者，年龄40～60岁，所有病例均无其他角膜、结膜疾患。
, http://www.100md.com
1.2方法 标本经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。取组织蜡块制成3～5 μm的切片。以PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照购自公司。
1.3结果判断 阳性细胞为呈棕黄色颗粒的阳性反应产物。每例标本光镜下任取5个视野进行细胞计数，至少计数500个细胞，以阳性细胞占细胞总数的百分比表示阳性表达程度。0%～5%为阴性(-)，6%～10%为弱阳性(+)，>10%为阳性(++)。
1.4统计学方法 所有统计学资料使用SPSS16.0软件统计，计数资料采用χ2检验，等级资料采用非参数检验中的Mann-Whitney U法，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 HE染色 正常结膜的上皮层由非角化复层鳞状上皮构成，上皮下见疏松的结缔组织，可见排列规整的毛细血管组织、淋巴组织和散在少量的炎性细胞。翼状胬肉的上皮层鳞状上皮增生明显，纤维结缔组织、新生血管组织增多且排列紊乱，这些特征在活动期翼状胬肉组织中表现得更加明显。
, 百拇医药
2.2 Caspase-3在翼状胬肉及正常结膜中的表达 光镜下，棕黄色阳性颗粒位于细胞核，阳性细胞呈随机分布。片状分布于上皮层及上皮下纤维层，但主要见于上皮基底层。正常结膜中未见到表达，见图1。图2为翼状胬肉细胞上皮中低表达Caspase-3的典型样本。静止期组和活动期组中，Caspases-3表达与正常对照组对比差异有显著性，蛋白表达在两组组间对比则差异无显著性，表明翼状胬肉中存在Caspases-3表达失衡，见表1。
3讨论
翼状胬肉是一种慢性增生性眼病。翼状胬肉在临床上分为活动期和静止期[3]，越来越多研究表明，翼状胬肉的发生发展在一定程度上来说与肿瘤的病因——异常增生与凋亡的失衡有相近之处。我们通过对Caspases-3在冀状胬肉上表达的观察，旨在进一步探讨其发病机制。作为凋亡机制中重要的效应子成分，Caspase家族参与多种与凋亡有关的生理和病理过程[4-6]，这是一个一旦被激活便不可逆的启动细胞程序性死亡程序的执行阶段，所以说Caspase蛋白家族是细胞程序性死亡的主要“执行者”。, 百拇医药(唐彦慧 彭子春 唐琪)
关键词：Caspase-3；翼状胬肉；临床分期；免疫组织化学
中图分类号：R777.33 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.03.022
文章編号：1006-1959(2018)03-0071-02
, 百拇医药
Abstract：Objective To investigate the expression and significance of Caspase-3 in pterygium at different clinical stages.Methods 20 cases of quiescent pterygium and 20 cases of active pterygium were detected by immunohistochemical Elibision method. Expression of Caspase-3 in epithelial cells of 10 cases of normal conjunctiva.Results The expression of Caspase-3 was low in pterygium epithelial cells.There was significant difference between pterygium group and normal control group(P<0.05)，but there was no significant difference in pterygium between static and active stage(P>0.05).Conclusion The low expression of Caspase-3 in pterygium epithelial cells suggests that the occurrence and development of pterygium may be related to the abnormal apoptosis and proliferation of pterygium cells.
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Key words：Caspase-3；Pterygium；Clinical staging；Immunohistochemistry
翼状胬肉(pterygium)是一种只发生在人类的常见眼表疾病，是临床上最为常见的眼科疾病之一[1]。研究表明，翼状胬肉的发生发展在一定程度上来说与肿瘤的病因——异常增生与凋亡的失衡有相近之处[2]，过度增殖和凋亡的减弱导致了结膜上皮细胞的增生和翼状胬肉的生长。我们应用免疫组织化学方法检测翼状胬肉组织中凋亡相关基因Caspases-3表达，旨在探讨凋亡基因产物在翼状胬肉发病机理中的作用。
1资料与方法
1.1一般资料 选择本院2015年1月～2017年6月住院的20例静止期翼状胬肉和20例活动期翼状胬肉患者的手术标本。本研究课题已经过医院伦理委员会审核。活动期为组织肥大并充血，血管增粗增大，头部区隆起，角膜有浸润；静止期为组织菲薄，无充血，无或存在少许纤维血管，头部平坦，角膜透明。对照组为10例正常结膜组织，采集于视网膜脱离、外伤等患者，年龄40～60岁，所有病例均无其他角膜、结膜疾患。
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1.2方法 标本经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。取组织蜡块制成3～5 μm的切片。以PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照购自公司。
1.3结果判断 阳性细胞为呈棕黄色颗粒的阳性反应产物。每例标本光镜下任取5个视野进行细胞计数，至少计数500个细胞，以阳性细胞占细胞总数的百分比表示阳性表达程度。0%～5%为阴性(-)，6%～10%为弱阳性(+)，>10%为阳性(++)。
1.4统计学方法 所有统计学资料使用SPSS16.0软件统计，计数资料采用χ2检验，等级资料采用非参数检验中的Mann-Whitney U法，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 HE染色 正常结膜的上皮层由非角化复层鳞状上皮构成，上皮下见疏松的结缔组织，可见排列规整的毛细血管组织、淋巴组织和散在少量的炎性细胞。翼状胬肉的上皮层鳞状上皮增生明显，纤维结缔组织、新生血管组织增多且排列紊乱，这些特征在活动期翼状胬肉组织中表现得更加明显。
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2.2 Caspase-3在翼状胬肉及正常结膜中的表达 光镜下，棕黄色阳性颗粒位于细胞核，阳性细胞呈随机分布。片状分布于上皮层及上皮下纤维层，但主要见于上皮基底层。正常结膜中未见到表达，见图1。图2为翼状胬肉细胞上皮中低表达Caspase-3的典型样本。静止期组和活动期组中，Caspases-3表达与正常对照组对比差异有显著性，蛋白表达在两组组间对比则差异无显著性，表明翼状胬肉中存在Caspases-3表达失衡，见表1。
3讨论
翼状胬肉是一种慢性增生性眼病。翼状胬肉在临床上分为活动期和静止期[3]，越来越多研究表明，翼状胬肉的发生发展在一定程度上来说与肿瘤的病因——异常增生与凋亡的失衡有相近之处。我们通过对Caspases-3在冀状胬肉上表达的观察，旨在进一步探讨其发病机制。作为凋亡机制中重要的效应子成分，Caspase家族参与多种与凋亡有关的生理和病理过程[4-6]，这是一个一旦被激活便不可逆的启动细胞程序性死亡程序的执行阶段，所以说Caspase蛋白家族是细胞程序性死亡的主要“执行者”。, 百拇医药(唐彦慧 彭子春 唐琪)